国家教育部博士点基金(20050598002) 作品数:10 被引量:34 H指数:4 相关作者: 李力 黎丹戎 阮和云 冠潇 张玮 更多>> 相关机构: 广西医科大学附属肿瘤医院 广西医科大学第一附属医院 广西壮族自治区肿瘤防治研究所 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 广西壮族自治区自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
SFRP1在卵巢癌淋巴结定向高转移细胞中的表达及意义 被引量:2 2009年 目的进一步探讨分泌型卷曲相关蛋白(SFRP1)在卵巢癌发生、发展中的作用。方法采用荧光定量PCR法定量分析SFRP1 mRNA在不同淋巴结转移能力卵巢癌Skov3细胞亚系中表达水平。结果SFRP1 mRNA在原代Skov3细胞与转移能力依次增高的Skov3-pm2、Skov3-pm3、Skov3-pm4细胞系中的表达呈下降趋势(P<0.05)。结论SFRP1在高淋巴结转移能力的卵巢癌细胞中表达减少,与卵巢癌发生、发展密切相关,其可作为监测卵巢癌的分子靶标。 倪萍 黎丹戎 李力关键词:卵巢癌 分泌型卷曲相关蛋白 卵巢癌淋巴结定向转移裸鼠动物模型的建立 被引量:2 2007年 目的:在裸鼠体内建立人卵巢癌定向淋巴道转移动物模型。方法:将卵巢癌细胞株SKOV3移植于裸鼠爪垫下,待裸鼠卵巢癌发生转移时,取其淋巴结转移灶癌细胞再次移植裸鼠爪垫下传代,反复传3代。结果:SKOV3卵巢癌细胞在裸鼠体内传3代后,各代裸鼠的淋巴结转移率一直稳定,且转移途径较为单一;各代癌细胞的体内外增殖能力不断增强。结论:成功建立了人卵巢癌定向高淋巴道转移模型。 阮和云 黎丹戎 李力 张玮关键词:卵巢肿瘤 肿瘤转移 卵巢上皮性癌淋巴结转移相关差异表达蛋白内质网氨基肽酶1的表达及意义 被引量:2 2010年 目的 从基因转录及蛋白表达的水平检测内质网氨基肽酶1(ERAP1)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞、组织中的表达,探讨其与卵巢癌转移的关系。方法应用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测在卵巢癌淋巴结非定向转移细胞系(SKOV3)与淋巴结定向高转移细胞系(SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3.pr04)中ERAP1mRNA和蛋白的表达情况;并应用免疫组化方法在人卵巢癌原发灶与相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶与相应的淋巴结转移灶中对ERAP1的蛋白表达进行验证。结果SKOV3、SKOV3-pm/2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞中ERAP1mRNA和蛋白的表达呈下降趋势(分别为0.118±0.012、0.031±0.003、0.028±0.003、0.016±0.005;0.91±0.33、0.09±0.03、0.10±0.04、0.05±0.04),其中,SKOV3细胞中ERAP1mRNA和蛋白的表达显著高于SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞,分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。ERAP1蛋白在人卵巢癌原发灶(184±14)和相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶(143±22)和相应的淋巴结转移灶(97±12)中的表达均旱下降趋势,分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论卵巢癌中ERAP1表达的下降或缺失与淋巴结转移有关。 刘冰 黎丹戎 倪萍 李力关键词:淋巴转移 integrin α6和MKK4基因在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞系中的表达及其意义 被引量:5 2009年 目的:探讨integrin α6、MKK4基因在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞亚系的表达及其意义。方法:采用TRIZOL一步法抽提卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞的总RNA,逆转录合成CDNA,应用RT-PCR技术检测integrin α6、MKK4基因在不同细胞亚系表达的灰度值,应用实时荧光定量PCR技术对integrin α6、MKK4基因在不同细胞亚系的表达进行定量分析。结果:integrin α6基因在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3细胞系中的表达呈上升趋势,但在SKOV3-PM4细胞系中的表达低于SKOV3细胞系。MKK4基因表达量在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、SKOV3-PM4细胞系呈逐渐下降趋势。结论:integrin α6表达上调和MKK4表达下调与卵巢癌的淋巴结定向高转移过程密切相关,出现integrin α6在SKOV3-PM4细胞系表达的下调的现象,可能存在整合素各亚单位之间的相互调控。 王菁 黎丹戎 李力关键词:卵巢癌 荧光定量PCR INTEGRIN MKK4 应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白 2008年 背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异。方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率。应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测。应用Ciphergen Protein Software3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较,峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白。结果:动物实验显示,细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10103、11655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达。结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关。 冠潇 黎丹戎 王琪 李力 阮和云 张玮关键词:SKOV3细胞株 蛋白芯片 差异蛋白 应用功能分类基因芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因 被引量:7 2008年 目的:在裸鼠体内建立以人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞系,应用基因芯片技术比较这3种具有不同淋巴结定向转移能力的细胞亚系中基因表达谱的差异,寻找卵巢癌侵袭转移相关基因。方法:采用Trizol一步法抽提SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm33种细胞总RNA;取等量RNA逆转录合成cDNA用Ampolabeling-LPR(linear polymerase re-action,线性聚合酶反应)法标记的cDNA链做探针,混合后与功能分类基因芯片[OligoTumor Metastasis Microarray Catalog No.OHS-028(人)]杂交,计算机分析后比较3种细胞中差异性表达基因,并应用RT-PCR技术对其中3个表达差异明显的基因进行验证。结果:共筛选出表达差异性基因60个,其中表达上调基因47个(ratio>3),有21个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3中共同表达上调;表达下调基因13个(ratio<0.5),有1个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞中共同表达下调。结论:基因表达芯片检测与肿瘤淋巴体外转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供了新方法、新思路。 冠潇 李力 黎丹戎 阮和云 尹永硕 张玮关键词:卵巢肿瘤 差异表达基因 卵巢上皮性癌淋巴道定向高转移细胞系的建立及其生物学特性的鉴定 被引量:10 2007年 目的筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)淋巴道定向高转移恶性肿瘤细胞亚群,并对其生物学特性进行鉴定。方法将卵巢癌细胞株 SKOV3细胞接种于裸鼠爪垫皮下,待植入细胞在裸鼠体内成瘤并发生转移时,取其淋巴结转移灶中癌细胞再次接种于裸鼠爪垫皮下传代,每代均取出淋巴结转移灶中癌细胞进行培养,通过单细胞分离(克隆)培养或局部淋巴结转移灶筛选的方法建立连续传代细胞系,重复传3代后,通过裸鼠接种实验观察各代裸鼠的淋巴结转移率。利用细胞生长曲线、HE 染色、染色体分析、流式细胞分析、裸鼠接种、免疫组化等方法鉴定各代细胞的生物学特性。结果所建立的连续传代1~3代的细胞系,分别命名为 SKOV3-PM1、SKOV3-PM2和 SKOV3-PM3细胞,癌细胞在裸鼠体内传3代后,裸鼠的淋巴结转移率为100%(10/10),原代 SKOV3细胞的淋巴结转移率为10%(1/10),两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);SKOV3-PM3细胞形成的淋巴结转移灶的数目(26/10)较 SKOV3细胞多(1/10,P<0.01);且转移灶多位于淋巴结。细胞染色体分析显示,SKOV3细胞染色体数目大多数分布在83~89条,SKOV3-PM3细胞染色体数目大多数分布在91~105条。SKOV3与 SKOV3-PM3细胞染色体数目比较,差异有统计学意义(P<0.05);转移灶中上皮膜抗原(EMA)表达呈阳性,证实转移细胞株保持着卵巢癌细胞的生物学特性;SKOV3-PM3细胞倍增时间为22.7 h,SKOV3细胞为49.6 h,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞分析显示,SKOV3-PM1、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3细胞的淋巴结转移灶中癌细胞的 DNA 合成期和分裂期细胞的比例分别为24.2%、29.4%和36.7%,明显高于 SKOV3细胞的21.5%(P<0.05)。结论本研究成功建立了卵巢癌淋巴道定向高转移细胞系,为研究卵巢癌的淋巴结浸润转移的发病机制提供了良好的实验材料。 阮和云 黎丹戎 李力 冠潇 张玮关键词:卵巢肿瘤 淋巴转移 细胞系 肿瘤 卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴定向高转移细胞分泌蛋白差异初筛 被引量:5 2013年 目的:分析卵巢癌细胞株(SKOV3)与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞株(SKOV3-PM4)分泌蛋白的差异,寻找与卵巢癌淋巴定向转移密切相关的潜在诊断分子标志。方法:分别收集SKOV3与SKOV3-PM4培养上清,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI_T0F-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点,对其进行生物学分析后采用蛋白质印迹法验证挑选目标蛋白在细胞分泌蛋白中的表达情况。结果:二维凝胶电泳显示,SK-OV3细胞分泌蛋白质点数约为569±156,SKOV3-PM4细胞分泌蛋白质点数约为598±175。选取差异较大的7个差异蛋白点进行MS+MS/MS质谱鉴定,分别为乙二醛酶1(GLO1)、翻译后调节肿瘤蛋白(TPTC)、二磷酸核苷激酶B(ND-PK-B)、膜联蛋白(ANXA1)、热休克蛋白27(HSP)、过氧化物氧化还原(PRDX1)和磷脂酰乙醇胺结合蛋白Ⅰ(PEBP-Ⅰ)。挑选NDPK-B、ANXA1和HSP蛋白经蛋白质印迹法验证发现,SKOV3-PM4细胞中ANXA1和HSP27表达高于SKOV3细胞,而NDPK-B表达低于SKOV3细胞。与质谱分析的结果基本一致。结论:在卵巢癌细胞与卵巢癌淋巴结定向高转移细胞之间分泌蛋白存在很大的差异,其中已被鉴定的ANXA1和HSP27与卵巢癌淋巴结转移密切相关,有望成为诊断或预测卵巢癌淋巴结转移患者血清检测的标志。 刘丽 黎丹戎 钟艳平 李力 高婷 阮和云 冠潇关键词:卵巢癌 分泌蛋白 二维凝胶电泳 淋巴管内皮细胞微环境对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞上皮-间质转化的影响 被引量:2 2013年 目的通过人卵巢癌淋巴结定向高转移的细胞株(SKOV3-PM4)与人淋巴管内皮细胞株(HLEC)的条件培养和共培养,探讨HLEC微环境对SKOV3-PM4的运动迁移能力以及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用transwell小室体外侵袭法,观察经HLEC的条件培养后SKOV3-PM4的侵袭、迁移能力的改变。SKOV3-PM4经HLEC的条件培养和共培养后的爬片细胞,采用免疫组化法检测转化生长因子(TGF-β1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的变化。结果经HLEC培养基的条件培养后SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(53±11)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的侵袭率为(30±5)%(P<0.05);条件培养后SKOV3-PM4细胞的迁移率为(48±5)%,单独培养的SKOV3-PM4细胞的迁移率为(34±2)%(P<0.05)。SKOV3-PM4细胞经条件培养和共培养后TGF-β1和vimentin表达上调(P均<0.05),E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论淋巴管内皮细胞微环境可促进卵巢癌淋巴结定向高转移细胞间质化的转变,增强卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。 刘丽 黎丹戎 钟艳平 李力 高婷 阮和云 冠潇关键词:微环境 血管内皮细胞对卵巢癌淋巴结定向转移细胞侵袭能力的影响 被引量:2 2012年 目的:研究血管内皮细胞对卵巢癌淋巴结高转移细胞的运动迁移和侵袭能力的影响。方法:建立卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)、人脐血管内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVEC)条件培养基的交互培养体系,通过MTT法测定生长曲线,HE染色观察细胞超微结构的改变,Transwell穿膜运动实验、划痕实验、明胶酶谱分析等实验方法研究交互培养后各组细胞的侵袭转移能力的变化。结果:与同期单独培养的SKOV3-PM4、HUVEC相比,交互培养后的SK-OV3-PM4伪足增多,生长速度明显快于SKOV3-PM4,交互培养后HUVEC呈不规则形态,出现空泡化超微结构,生长速度与HUVEC相似,细胞的运动和侵袭能力增强,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在单独的SKOV3-PM4中低表达,在HUVEC中不表达,在共培养的SKOV3-PM4-HUVEC中高表达。结论:HUVEC上清液培养后的SKOV3-PM4的生物学行为和运动侵袭能力发生改变,推测可能与血管内皮分泌的VEGF、MMP-2等因子有关。 高婷 黎丹戎 李力 张玮 阮和云 冠潇关键词:卵巢癌