湖南省自然科学基金(07JJ4008)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 纳米谷氨酸壳聚糖制备及其体外质粒转染研究
- 2008年
- 采用表面修饰方法制备出谷氨酸修饰的壳聚糖纳米基因载体。对样品进行红外分析、粒度分析、zeta电位分析、生物相容性、凝胶阻滞分析、DNA保护性试验、体外细胞转染研究。结果显示所制得的谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒平均粒径为170nm,其zeta电位为+4.7mV。红外分析显示谷氨酸已通过酰胺键结合在壳聚糖上。MTT实验结果显示纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性。凝胶阻滞分析和DNA保护试验结果表明纳米载体可与DNA通过电性结合作用而结合,并可以有效保护DNA,防止核酸酶对其的降解作用。而体外细胞转染的结果表明,谷氨酸修饰的纳米粒能介导pEGFP-N1质粒转染HepG2细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白。因此,谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒可作为一种新型非病毒基因载体介导核酸类生物大分子进入细胞内。
- 何琼琼肖旭贤冯德云
- 关键词：谷氨酸纳米壳聚糖基因载体
- HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响
- 2008年
- 目的研究HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响。方法通过脂质体稳定转染分别建立表达HCV NS3蛋白的pRcHCNS3/QSG细胞,空白质粒转染细胞pRcCMV/QSG。用Western Blot和免疫细胞化学分别检测磷酸化p44/42,磷酸化p38,磷酸化SAPK/JNK在pRcHCNS3/QSG细胞和pRcCMV/QSG细胞及未转染的QSG7701细胞的表达差异及细胞内的定位;免疫共沉淀实验检测HCV NS3对磷酸化酪氨酸蛋白表达水平的影响。结果pRcHCNS3/QSG细胞,pRcCMV/QSG细胞,未转染的QSG7701细胞抽提的总蛋白中均可检测出磷酸化p44/42,磷酸化p38,磷酸化SAPK/JNK的表达,阳性信号定位于细胞核。上述3种蛋白在pRcHCNS3/QSG细胞的表达较pRcCMV/QSG细胞和未转染的QSG7701细胞表达增强,其磷酸化酪氨酸蛋白的表达也较其他两对照组增强。结论HCV NS3可能通过影响酪氨酸蛋白激酶的表达及活性,使一系列受酪氨酸蛋白激酶调节的蛋白质如MAPK分子异常磷酸化而活化,激活下游信号转导通路,导致肝细胞无限增殖和肿瘤形成。
- 何琼琼肖旭贤冯德云程瑞雪郑晖李波
- 关键词：丙型病毒非结构蛋白质类蛋白磷酸化
