湖南省教育厅科研基金(05C325)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：谭晓风张党权仲健王金发仲健更多>>
- 相关机构：中南林业科技大学国家工程研究中心中山大学更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金中南林业科技大学青年科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达被引量：2
- 2006年
- 胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起着关键的作用．为了探明该关键氨基酸对DcAFP重要性,需要对其进行一系列突变,以检测这些突变体的热滞可能发生的变化,而这需要构建大量的突变体．基于此,采用定点突变技术对该基序中保守的天冬酰胺进行了一系列的疏水性缬氨酸突变和亲水性的谷氨酰胺突变,并将这一系列突变体克隆至原核表达载体pET-11a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达与初步纯化,为后续测定其热滞活性的变化和验证天冬酰胺的重要性打下了基础．
- 张党权谭晓风仲健王金发
- 关键词：生物技术胡萝卜抗冻蛋白定点突变原核表达
- 用于筛选植物PGIP的酵母双杂交PGase诱饵载体
- 2006年
- 对真菌抗性较强的植物能利用自身的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(po lyga lacturonase-inh ib iting prote in,PG IP)来抑制真菌分泌的、降解植物细胞壁的主要物质——多聚半乳糖醛酸酶(po lyga lacturonase,PG ase)的活性.目前,快速、有效的获取植物PG IP的方法是通过酵母双杂交技术来进行的,而这首先要获得真菌PG ase的酵母诱饵载体.以真菌——互格链格孢PG ase的cDNA的为基础,将其克隆到M ATCHM AKER L exA Tw o-Hybrid System的诱饵载体中,并将诱饵载体(pL exA-PG ase)成功转化酵母菌株EGY 478[p8op-lacZ],经检测无自激活作用,可直接用于快速、大量地筛选植物PG IP.
- 张党权谭晓风
- 关键词：遗传育种多聚半乳糖醛酸酶酵母双杂交多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白诱饵载体
- 互格链格孢多聚半乳糖醛酸酶的cDNA克隆被引量：1
- 2006年
- 在提取真菌互格链格孢(Alternaria alternata)总RNA的基础上,通过一步法RT-PCR技术,获得了多聚半乳糖醛酸酶(PGase)的cDNA,并将其克隆至载体pBluescript SK(-),经双酶切和测序分析后,通过Gen-Bank对其进行序列比对分析。结果表明该cDNA序列与已公布的序列存在14个碱基的差异,密码子简并性只导致3个氨基酸的不同,但不影响PGase与多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)的结合能力。研究结果为利用酵母双杂交技术来获得高活性的植物PGIP打下了基础。
- 张党权谭晓风仲健
- 关键词：多聚半乳糖醛酸酶CDNA克隆
