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HIV结构蛋白p24与三基序蛋白22胞内定位及出胞研究被引量：1: 2016年; 比较p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRed-Monomer三种荧光蛋白的表达强弱,观察p24-DsRed1与TRIM22-EGFP结合物在细胞中的分布特点。构建pDsRed1-N1-p24及pDsRed2-N1-p24真核表达载体,转染HEK293T细胞,经荧光显微镜比较三种p24-DsRed荧光偶联蛋白的表达强度。选择荧光强度最强的pDsRed1-N1-p24与pEGFP-N3-TRIM22共转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察两者结合物在细胞中的分布特点。结果显示,经荧光显微镜检测,转染48h后红色荧光蛋白强度由大到小依次为p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRedm。在HEK293T细胞中共转染p24-DsRed1和TRIM22-EGFP,发现两者存在共定位关系,有意思的是两者的结合体能以出胞形式脱离细胞。结果表明,p24-DsRed1荧光蛋白强度显著高于p24-DsRed2和p24-DsRedm,TRIM22-p24结合物能以出芽形式脱离细胞。; 孙大康宋向芹安新业程艳丽; 关键词：DSRED 出芽

HIV衣壳蛋白P24与TRIM22在HEK293T细胞中的表达及共定位被引量：2: 2015年; 目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况。方法以慢病毒载体p LP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至p DsRed-Monomer-N1真核表达载体。经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将p DsRed-Monomer-N1-p24与p EGFP-N3-TRIM22载体共同转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP的表达及共定位情况。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建p DsRedMonomer-N1-p24真核表达载体。通过荧光显微镜检测发现,p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP在HEK293T细胞中存在共定位关系。结论 HIV衣壳蛋白P24与TRIM22存在共定位。; 孙大康安新业周玉明纪兵宋向芹徐殿红; 关键词：人类免疫缺陷病毒衣壳蛋白 P24 共定位

三基序蛋白34(TRIM34)与微核染色体共定位并阻碍染色体在有丝分裂中期向赤道板的移动被引量：2: 2016年; 目的观察三基序蛋白34（TRIM34）与微核是否存在共定位关系,及对微核染色体在有丝分裂时移动的影响。方法构建并鉴定TRIM34-p EGFP-N3真核表达载体,转染TRIM34-p EGFP-N3载体至HEK293T细胞,经4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色,用荧光显微镜观察TRIM34与微核间是否存在共定位关系。通过激光共聚焦显微镜技术结合Mito TrackerDeep Red线粒体示踪剂,进一步明确TRIM34、微核与线粒体间的位置关系。观察TRIM34-微核结合体在HEK293T细胞有丝分裂中期与赤道板的位置关系。结果经测序鉴定,成功构建TRIM34-p EGFP-N3真核表达载体。TRIM34-p EGFP-N3载体转染HEK293T细胞后,通过荧光显微镜发现TRIM34与微核可能存在共定位关系。经激光共聚焦显微镜技术进行后续检测发现,存在共定位关系的TRIM34小体与微核间在外形上较一致。TRIM34-微核结合体与线粒体未见明显的共定位关系。在有丝分裂中期,结合TRIM34的微核染色体不能移动至赤道板。结论 TRIM34可以结合微核染色体,阻碍后者在有丝分裂中期向赤道板的移动。; 孙大康安新业纪冰程艳丽高洪莲田明明; 关键词：微核

Trim6结合并降解接头蛋白TAB2抑制NF-κB活化被引量：1: 2012年; 观察Trim6是否与接头蛋白TAB2存在蛋白相互作用,进而影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因的活化。在HEK293T细胞中共转染Trim6及TAB2的真核表达载体,免疫共沉淀法验证两者是否存在蛋白相互作用;用蛋白印迹法验证Trim6是否能降解TAB2;同时用双荧光素酶报告基因系统检测Trim6是否影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因活化。免疫共沉淀结果证明Trim6与TAB2存在蛋白相互作用;蛋白印迹检测发现Trim6能显著降解TAB2,进而明显抑制TAB2介导的NFκB荧光素酶报告基因的活化。; 孙大康安新业周荣佼赵延婷宋向芹; 关键词：蛋白相互作用

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山东省高等学校科技计划项目(J11LF89)