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汉坦病毒部分S基因在毕赤酵母中的分泌表达: 2009年; 目的构建并表达汉坦病毒（HV）Z10株（HV-Z10）S基因蛋白编码区前300bp核苷酸序列，研究该基因在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达及其产物的生物活性。方法根据HV-Z10 S基因前300bp（S300）的核苷酸序列，按照编码氨基酸的密码子转换成酵母偏爱的形式，设计合成8条引物，通过连续PCR，获得人工合成Z10株S基因前300bp的基因序列SP300，经测序，SP300与S300的核苷酸相似性为76.2％，但编码的氨基酸序列完全一致。将SP300克隆到酵母穿梭载体pPICZaA，构建含α-factor分沁信号肽的重组表达载体pPICZaA-SP300。将pPICZaA-SP300、pPICZaA-S300化学法转化酵母GS115菌株，筛选重组转化子。结果重组了SP300与S300的酵母转化子经甲醇诱导，表达出重组蛋白rNP300及rN300，SDS-PAGE显示相对分子质量为12×10^3左右。经ELISA检测及Western Blot分析，表达产物能与抗汉坦病毒抗体起免疫反应。结论SP300和S300基因在毕赤酵母中获得分泌表达，使用酵母偏爱密码子的SP300基因在毕赤酵母中的表达量与S300的表达量基本一致，表达量在诱导24h后最高。; 朱函坪姚苹苹邓小昭徐芳谢荣辉朱智勇张云; 关键词：汉坦病毒属基因基因表达毕赤酵母

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国家高技术研究发展计划(2007AA02ZA465)