宁夏回族自治区自然科学基金(NZ1086)
- 作品数：7 被引量：26H指数：3
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- 基因组DNA甲基化在同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨基因组DNA甲基化变化在Hcy致VSMCs增殖的作用机制。方法原代培养VSMCs并鉴定,用0、50、100、200、500μM浓度Hcy干预,MTT法检测VSMCs活性;SssI甲基转移酶法分析基因组DNA甲基接受能力,甲基化敏感性限制性内切酶法分析基因组DNA甲基接受能力及DNA甲基转移酶活性。结果 MTT法表明在50μM Hcy时,VSMCs活性明显增加,其余活性下降,与各浓度组并不呈量效依赖关系;Hcy可增加DNA甲基接受能力,以50μM Hcy组效应最显著(P<0.05);HpalI限制核酸内切酶消化,与对照组比较,基因组DNA甲基化接受能力减少了50.1%、41.7%、46.1%和25.5%(50、100、200、500μM Hcy组),BssHII限制核酸内切酶消化后,基因组DNA甲基化接受能力减少了约25.5%、18.1%、17.4%和18.0%(50、100、200、500μM Hcy组)。结论 Hcy引起VSMCs基因组DNA去甲基化是平滑肌细胞增殖的重要机制之一,其效应偏重发生于CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小,其最大效应在50μMHcy组,且无明显的量-效依赖关系。
- 姜怡邓马琳娜韩学波王菊徐支芳于海娇
- 关键词：同型半胱氨酸平滑肌细胞增殖
- 同型半胱氨酸引起平滑肌细胞LDLR启动子区DNA甲基化改变的位点分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)引起平滑肌细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)启动子区DNA甲基化改变的特点及机制。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs)并鉴定,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy干预,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化改变,甲基敏感性限制性内切酶HpaII和BssHII分析LDLR DNA甲基接受能力。结果 50、100、200、500μmol·L-1Hcy组平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化(P<0.05),经限制性内切酶HpaII消化后,LDLR启动子区C↓CGG序列被酶切,经限制性内切酶BssHII消化后,LDLR启动子区GC↓GCGC序列被酶切,与对照组比较,DNA甲基接受能力下降,其中HpaII引起的效果更明显。结论 Hcy可使平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化的效应偏重于一般的CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小。
- 杨安宁王菊杨晓玲马长剑孙炜炜马胜超王磊徐华姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸低密度脂蛋白受体DNA甲基化平滑肌细胞
- LDLR启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)在同型半胱氨酸(Hcy)致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用机制。方法原代培养VSMCs,用50、100、200及500μmol/L Hcy干预72 h;MTT法观察VSMCs增殖的活性,ELSIA法和同位素法分别检测VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性;实时定量PCR和巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测LDLR的表达和启动子区DNA甲基化的状态。结果随着Hcy浓度的增加,VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性明显增加,而VSMCs增殖活性下降,同时LDLR mRNA表达增高,且LDLR基因启动子区呈低甲基化状态,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 LDLR基因启动子区DNA低甲基化致LDLR表达增高可能是Hcy引起VSMCs损伤的重要机制之一。
- 姜怡邓孙炜炜马长剑王菊马胜超巩慧慧梁宇
- 关键词：低密度脂蛋白受体同型半胱氨酸血管平滑肌细胞
- 同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响。方法原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响。结果内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且以50或100μM Hcy组最明显。结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制。
- 孙炜炜马琳娜徐支芳马长剑王菊巩慧慧姜怡邓
- 关键词：低密度脂蛋白受体DNA甲基化同型半胱氨酸
- LDLR DNA甲基化在Hcy致泡沫细胞形成中作用机制的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞形成中的作用机制。方法原代培养单核细胞,采用佛波酯(PMA)和ox-LDL刺激复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μM Hcy干预72h,油红O染色半定量分析泡沫细胞数量,酶免法检测泡沫细胞中ox-LDL含量;同位素法测定LDLR活性,分析Hcy对LDLR的影响,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化的变化,观察Hcy对LDLR的作用。结果泡沫细胞与0、50、100、200、500μM Hcy培养72h后,泡沫细胞数量明显增加,细胞中ox-LDL含量和LDLR活性明显增加,LDLR DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 Hcy引起泡沫细胞形成除了氧化应激外,LDLR DNA甲基化异常也可能是泡沫细胞形成和Hcy引起AS的又一重要机制。
- 姜怡邓马琳娜孙炜炜王菊梁宇
- 关键词：氧化低密度脂蛋白受体同型半胱氨酸
- 同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成和胆固醇流出的影响被引量：4
- 2011年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成和胆固醇流出的影响及其特点。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol.L-1浓度Hcy和100μmol.L-1Hcy+叶酸+维生素B12(VB12)干预24h,油红O染色检测泡沫细胞的形成;采用酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞胆固醇流出的影响,人ox-LDL;酶联免疫(ELISA)试剂盒检测泡沫细胞胞内ox-LDL的含量。结果 Hcy加剧了泡沫细胞的形成,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但不呈量效关系,以100μmol.L-1浓度的Hcy组效应最显著(P<0.01);在Hcy干预下泡沫细胞胞内TC、FC、CE的流出减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),以100μmol.L-1浓度的Hcy组效应最显著(P<0.01),同时100μmol.L-1Hcy+叶酸+VB12组与100μmol.L-1浓度的Hcy组比较显示前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多;在Hcy干预下泡沫细胞胞内ox-LDL的含量增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy促进THP-1单核细胞源性泡沫细胞的形成,减少胞内胆固醇的流出,在动脉粥样硬化的发生发展中起了重要作用。
- 马琳娜梁宇于海娇徐支芳韩学波姜怡邓
- 关键词：动脉粥样硬化同型半胱氨酸泡沫细胞
- 高同型半胱氨酸血症对ApoE^(―/―)鼠心肌酶谱的影响及与P53基因的相关性分析被引量：9
- 2013年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对载脂蛋白E基因敲除鼠(ApoE―/―鼠)心肌酶谱变化的影响及其与P53基因的相关性分析。方法分组:正常对照组(n=12)选择健康5周龄雄性C57BL/6J小鼠(SPF级),饲以正常饮食;另选用SPF级近交系C57BL/6J背景5周龄雄性ApoE―/―小鼠36只,随机分为3组,每组12只:ApoE―/―鼠对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、正常饮食加1.7%蛋氨酸、正常饮食加1.7%蛋氨酸加0.006%叶酸及0.000 4%维生素B12。喂养14周后,分离血清,用全自动生化分析仪检测血清中同型半胱氨酸和心肌酶谱含量,酶联免疫吸附法检测血清中氧化型低密度脂蛋白含量,实时定量PCR和免疫组织化学法检测心脏P53 mRNA和蛋白表达。结果 ApoE―/―对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸均升高,其中以高蛋氨酸组升高最显著(P<0.01);氧化型低密度脂蛋白含量亦平行升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。高蛋氨酸组血清乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶和肌酸激酶及肌酸激酶同工酶含量较正常对照组明显增高,在添加叶酸及维生素B12的干预组中血清肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和羟丁酸脱氢酶含量较高蛋氨酸组降低。实时定量PCR结果显示高蛋氨酸组P53 mRNA表达上调,免疫组织化学法检测P53蛋白的表达与其mRNA表达变化一致。P53表达与血清肌酸激酶含量呈正相关(r=0.7061,P<0.01)。结论 HHcy可引起ApoE―/―鼠心肌酶谱发生改变,其机制可能与同型半胱氨酸导致的氧化应激有关。这种改变与P53的表达呈正相关,P53亦可能参与其病理过程。补充叶酸及维生素B12对于食饵性HHcy具有良好的治疗效用。
- 姜怡邓杨安宁王菊巩慧慧马长剑杨晓玲李桂忠
- 关键词：高同型半胱氨酸血症心肌酶谱P53
