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携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体的构建及表达被引量：5: 2009年; 目的构建携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体,并研究其在CD4+CD25-T细胞中的表达。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体。采用脂染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转导效率,通过RT-PCR及Western Blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测Foxp3的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP/pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/mL。以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞基因转导效率达55.95%,并且存在Foxp3 mRNA和蛋白水平的高表达。结论成功构建了携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体;该系统可有效的介导Foxp3基因在CD4+CD25-T细胞中表达。; 曹江陈翀徐开林潘秀英李振宇曾令宇; 关键词：慢病毒 FOXP3 调节性T细胞

自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞的制备和特性研究被引量：4: 2009年; 目的制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞（Treg细胞），检测其表型变化，并观察其增殖能力及免疫抑制能力。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列（IRES）和绿色荧光蛋白基因（GFP）的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞，经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4^＋CD25-T细胞，流式细胞术（FCM）检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达，CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES—GFP、pXZ208·Foxp3-IRES—GFP，包装的重组慢病毒滴度达10^6IU／ml。以pXZ208-IRES—GFP为阴性对照组，共培养法感染CD4^＋CD25-γ细胞，实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高。在抗CD3e单抗、抗原呈递细胞存在条件下，实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组（P〈0．01）；且该细胞可显著抑制CI）4^＋CD25-T细胞的增殖。结论成功构建了自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程Treg细胞；基因工程Treg细胞具有与CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞相似的表型及低增殖性和免疫抑制性。; 曹江陈翀曾令宇李振宇程海潘秀英徐开林; 关键词：慢病毒转录因子FOXP3 T淋巴细胞调节性

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江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(CX07S-039Z)

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