上海市自然科学基金(09ZR1417500)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院复旦大学上海医学院上海交通大学更多>>
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- 微血管环境影响中枢神经再生的研究进展
- 2010年
- 神经干细胞（NSCs），特别是成体神经干细胞的发现为哺乳动物中枢神经系统（CNS）的再生修复带来了新的希望。目前研究结果显示NSCs的增殖、迁移、分化过程受到其周围复杂微环境信号的调控，而其中由多种成分组成的微血管环境信号系统发挥了重要作用。在CNS修复过程中，
- 杨西涛冯东福朱志安
- 关键词：环境影响中枢神经再生微血管成体神经干细胞中枢神经系统再生修复
- Wnt3a影响大鼠海马神经干细胞增殖的体外研究被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨Wnt3a对胚胎大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外增殖的影响。方法:采用机械分离、无血清传代培养法,从胎鼠海马中获得NSCs,使用免疫荧光法对NSCs及其分化情况进行鉴定。将NSCs与5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)共孵育,观察Wnt3a对NSCs体外增殖情况的影响。结果:海马源胚胎NSCs具有增殖能力,可以传代培养,可分化为神经元和星形胶质细胞。与Brdu共孵育后,添加Wnt3a的实验组Brdu阳性率高于对照组(P<0.01)。结论:使用机械分离、无血清培养的方法获得的NSCs具有增殖和多向分化能力,Wnt3a可以促进大鼠海马NSCs的体外增殖。
- 王永志陈二涛冯东福毕永延杨西涛
- 关键词：神经干细胞海马WNT3A增殖
- 视神经部分损伤后视网膜基质细胞衍生因子-1α表达的变化被引量：2
- 2009年
- 目的研究大鼠视神经部分损伤后视网膜基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的表达变化。方法制作大鼠视神经部分损伤模型,于损伤后1、2、3、5、7、10、14d收集视网膜组织,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR分别测定损伤组(n=28)、假手术组(n=28)和正常对照组(n=12)大鼠视网膜组织中的SDF-1α蛋白及mRNA的表达。结果视神经损伤后各时间点,损伤组视网膜组织中SDF-1α蛋白和mRNA的表达较假手术组及正常对照组均明显升高(P<0.01),均在损伤后第5天出现峰值。伤后14d,损伤组视网膜组织中SDF-1α蛋白及mRNA仍维持在高表达状态。结论视神经部分损伤后SDF-1α在视网膜中的表达出现上调,并可在较长时间内维持高表达。
- 潘栋超毕永延冯东福陈二涛楚胜华汪洋
- 关键词：视神经损伤视网膜基质细胞衍生因子-1Α
- Wnt3a影响神经干细胞分化的体外研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Wnt3a对胚胎大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法采用机械分离、无血清传代培养法从胎鼠海马中获得NSCs,使用免疫荧光法对其干细胞特性及其受体Fzd3蛋白表达进行鉴定,观察Wnt3a对NSCs体外分化的影响。结果海马NSCs表达特异性标志物巢蛋白及胞膜蛋白Fzd3;体外诱导分化,Wnt3a处理组神经元及星形胶质细胞分化的比例分别为11.25%±0.62%和56.26%±4.82%,而对照组则为8.54%±0.48%和68.42%±5.54%;组间分化差异具有统计学意义(P<0.05)。结论体外环境下Wnt3a能够促进NSCs向神经元分化,并抑制其向星形胶质细胞分化。
- 王永志陈二涛高丰厚冯东福毕永延
- 关键词：神经干细胞海马体外培养WNT3A分化
- 小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染被引量：3
- 2010年
- 目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照。免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达。结果经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL。Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性。Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7 d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P<0.01)。结论成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs。
- 毕永延潘栋超冯东福陈二涛汪洋
- 关键词：WNT3A绿色荧光蛋白慢病毒载体
- 基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的 观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响.方法 由胚胎大鼠脑组织获取NSCs并进行传代培养和分化鉴定,使用流式细胞术检测NSCs纯度及SDF-1特异性受体CXCR4的表达情况,之后利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1（0 ng/L、1 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL和1000 ng/mL）对NSCs迁移数量的影响,并使用μ-载片观察SDF-1对NSCs迁移距离的影响.结果成功分离培养得到了能够在体外不断分裂增殖、具有多向分化潜能的NSCs,连续传3代后绝大部分细胞nestin表达阳性,nestin和CXCR4的共表达率达到80%左右.细胞趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500ng/mL时达到最高峰[（256.79±38.27）个细胞/每高倍视野].在μ-载片细胞生长通道两侧的SDF-1浓度梯度（500ng/mL→0ng/mL）作用下,由细胞克隆球迁出的细胞呈不对称分布,通常有更多的迁出细胞分布于趋化因子浓度较高的一侧,且该侧细胞的最大迁移距离也比对侧远.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相巨作用能够诱导NSCs发生靶向性迁移.
- 陈二涛潘栋超冯东福毕永延汪洋朱志安
- 关键词：神经干细胞基质细胞衍生因子-1细胞迁移
- 基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用被引量：4
- 2010年
- 目的 观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响.方法 由GFP转基因SD大鼠胚胎脑组织获取NSCs并进行传代培养,免疫细胞化学染色法检测SDF-1特异性受体CXCR4的表达,利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1（0、1、10、50、100、500、1000μg/L）对NSCs定向迁移数量的影响,随后分别使用CXCR4激动剂和阻断剂处理NSCs,再次利用上述方法观察最适浓度SDF-1时NSCs的迁移.结果 成功分离培养得到能够稳定表达GFP的NSCs,且CXCR4在该种NSCs上有表达.体外趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500μg/L时达到最高峰;CXCR4特异性激动剂和阻断剂分别能够增强和减弱SDF-1对NSCs定向迁移的趋化作用.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相互作用,能够对NSCs的定向迁移产生靶向性作用.
- 陈二涛冯东福潘栋超毕永延汪洋朱志安
- 关键词：神经干细胞趋化性基质细胞衍生因子-1
