中国烟草总公司科技项目(200910)
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
- 相关作者：赵丹赵德刚秦利军赵杰宏李世升更多>>
- 相关机构：贵州省烟草科学研究院贵州大学武汉市蔬菜科学研究所更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金中国烟草总公司科技项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 烟草子房注射法转基因试验
- 2013年
- 为了快速获得转基因烟草,对烟株子房注射处于对数生长期的含有外源基因的根癌农杆菌菌液。结果表明:通过初步的50mg/L Kana抗性筛选及PCR检测,烟草子房注射法能成功获取转入的外源基因得到转基因烟草。烟草子房注射法与烟草叶盘转化法等常规转基因方法相比,子房注射法简化了试验过程,缩短了试验周期,提高了试验效率。
- 邹颉余婧付强李世升
- 关键词：转基因根癌农杆菌烟草
- 烟草转基因研究常用遗传元件筛查策略被引量：2
- 2014年
- 通过检索国内外近10年烟草转基因研究的相关文献,建立了转基因烟草常用转化遗传元件的数据库,统计了每个遗传元件及组合元件的使用频率后,发现利用7种遗传元件,包括:启动子P-35S、标记基因NPT II、HPT、Bar和aadA、报告基因GUS及终止子T-NOS作为靶标元件组合,能使目前烟草转基因事件的理论筛查率达到100%,从而构建出转基因烟草的优化筛查策略。
- 余婧张孝廉赵丹邹颉赵杰宏
- 关键词：转基因烟草
- 超量表达NrCN基因提高烟草植株对TMV的抗性被引量：5
- 2014年
- 利用农杆菌介导的遗传转化法将含有普通烟草Ubi．U4启动子驱动MrCN基因表达的元件导入TMV敏感烟草品种K326中，对筛选鉴定出的T0代转基因植株接种TMV,测定其接种前后不同时期的理化指标，以接种TMV的野生型植株为对照。结果显示，转基因植株和野生型植株接种TMV前叶绿素（Chl）和MDA含量YLSOD、POD和CAT酶活力均无显著差异，但接种TMV后野生型植株Chl含量逐渐降低，转基因植株Chl含量先增后降，在接种TMV后5d时转基因植株叶片Chl含量显著高于野生型植株。接种前期（0-3d）转基因植株MDA含量略低于野生型植株，但差异不显著；但接种后期（3～5d）前者的MDA含量显著低于后者。接种TMV后转基因植株中SOD、POD及CAT酶活性变化幅度较野生型植株高，以CAT的变幅最为显著。另外，Real-timePCR分析结果表明，接种TMV后3d时转基因植株删蹦、PR-1α及NrCN表达量均显著高于野生型植株。以上结果表明，通过转基因技术提高烟草抗病基NNrCN的表达量，能提高防御酶活性及病程相关基因的表达量，从而延缓植株感染TMV的发病时间，增强敏感植株对TMV的抗性。
- 秦利军孙洪荣赵丹赵杰宏赵德刚
- 关键词：TMV抗性防御酶活性烟草
- 共转化法获得HAK1基因高表达烟草提高植株钾吸收能力被引量：21
- 2013年
- 通过农杆菌介导,将仅含钾转运体蛋白基因HAK1和烟草TMV抗性蛋白基因CN的pSH-TH表达载体和仅含选择标记基因GUS::NPTII的pSH737表达载体共转化烟草K326,从抗性转化苗中筛选出32株T0代转基因植株,自交分离后经筛选获得43株无选择标记的T1代转基因烟株,Southern blotting分析和PCR产物测序结果证明HAK1及CN功能基因已整合到烟草基因组中,且不含标记基因。转基因植株中的钾转运相关基因表达分析表明,细胞质膜P-H+-ATPase基因NHA1和烟草无机焦磷酸酶基因NVP1表达上调,烟草液泡膜V-H+-ATPase基因VAG1表达下调;而烟草钾外流通道蛋白基因TORK1表达在株系T1-87中下调,其余株系均上调;HAK1表达量除了在株系T1-141中下调外,在其他所有株系中均上调,其中株系T1-12、T1-51、T1-87和T1-100的HAK1表达量比野生型高3倍以上。株系T1-51、T1-87和T1-100的根系活力、ATPase活性、阳离子交换量(CEC)及钾含量均显著高于野生型,表明钾离子转运体基因HAK1超量表达显著提高了烟草植株的富钾能力,所获得的无标记的安全转基因株系可作为优质烟叶品质培育的亲本材料。
- 谭颖秦利军赵丹赵杰宏赵德刚
- 关键词：烟草共转化钾
- 烟碱去甲基化酶及降烟碱相关遗传改良研究进展被引量：1
- 2013年
- 综述了近年国内外烟碱去甲基化分子机制方面的研究进展:烟碱去甲基化过程所需要的关键酶属于烟草内源P450氧化酶的亚型之一,该酶在普通栽培烟草中存在多个等位基因版本,其中多数在现代烟草中失活,主要的催化活性来自CYP82E4和CYP82E5,这两个基因的主要诱导因素为衰老及烟草中的转化现象;介绍了烟草遗传育种领域各种阻断烟碱去甲基化以及降低降烟碱积累的遗传改良方法;并结合近年来发展起来的育种新技术对如何降低烟叶中的烟草特有亚硝胺的分子育种进行了展望。
- 邹颉余婧付强林叶春赵杰宏
- 关键词：降烟碱分子育种
- 烟草早期胚胎细胞观察方法研究被引量：3
- 2013年
- 【目的】分析整体透明法和酶解分离法在烟草早期胚胎观察中的应用效果,为烟草细胞发育研究提供参考。【方法】分别采用整体透明法和酶解分离法对烟草早期胚胎细胞进行连续观察,分析两种方法的优缺点。【结果】采用整体透明法观察烟草胚胎,均可清晰观察到烟草的2-细胞原胚、4-细胞原胚至未分化的球形胚,而观察的早期球形胚基部胚柄不够清晰,且后期发育的胚胎不易观察。酶解分离法能够观察到烟草整个发育阶段的胚胎,即烟草2-细胞原胚、开始分化的球形胚、心形胚;但经二次酶解分离,从2-细胞原胚到16-细胞早期球形胚时期的胚胎细胞均存在质壁分离现象,而晚期胚胎未出现此现象。整体透明法具有操作简便、所需材料较少、具有原位地形学观察等优点,能够保持胚胎组织的原位性。酶解分离法耗时较短,但其胚胎细胞缺乏原位性,部分存在质壁分离现象,可获得独立的不包含母体组织的胚胎细胞。【结论】在烟草胚胎发育时期,可根据对不同时期胚胎研究的需要,合理选择适宜的观察方法;或结合整体透明观察法与酶解分离法对早期胚胎进行观察,提高烟草胚胎发生的连续观察效果。
- 邹颉李世升
- 关键词：烟草胚胎发生
- 烟草CYP82E4v1基因调控降烟碱的生物合成被引量：6
- 2014年
- 为明确烟草烟碱去甲基酶基因CYP82E4v1在降烟碱生物合成中的调控作用,通过农杆菌介导,将含CYP82E4v1超量表达的植物表达载体pLF-35S-CYP和干涉表达的植物表达载体pLF-35S-CYPi分别遗传转化烟草品种K326,共获得转基因植株61株,其中超量表达植株42株,干涉表达植株19株。HPLC测定表明,超量表达植株降烟碱含量比对照烟草品种K326高88.9%,而干涉表达植株降烟碱含量比对照烟草低61.1%,表明CYP82E4v1的超量表达能提高烟草降烟碱含量,该基因的表达受到抑制时降烟碱合成受阻。Real-Time PCR分析结果表明,超量表达植株中CYP82E4v1基因的表达为对照烟草的20倍以上,在干涉表达植株中其表达量仅为对照烟草的6%。同时,在干涉表达植株中其他降烟碱合成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑制。此外,在构建植物表达载体时,引入衰老基因SAG12启动子驱动重组酶基因FLP的"Gene-deletor"表达元件,在烟草叶片发育后期以清除转基因植株中外源GUS∷NPT II基因,从而获得了降烟碱含量低且不含筛选标记基因的转基因烟草植株。
- 赵丹秦利军孙洪荣赵杰宏赵德刚
- 关键词：烟草降烟碱RNAI
