山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2008BS06010)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张伟王金星赵小凡康翠洁李殿香更多>>
- 相关机构：山东大学济南大学更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 家蝇幼虫消减文库的构建及差异表达基因的鉴定被引量：4
- 2010年
- 为了鉴定家蝇Musca domestica免疫相关基因,应用抑制性消减杂交技术,构建刺激家蝇幼虫差异表达cDNA消减文库。以大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus诱导12h的家蝇幼虫与未诱导的家蝇幼虫为消减杂交对象,获得了差异表达基因的cDNA片段,将其与T/A载体连接并转化大肠杆菌DH5α,构建了刺激家蝇幼虫cDNA消减文库。PCR检测发现,文库的阳性克隆中插入的cDNA片段大小在200～1000bp之间,随机挑选了161个含大小不等差异片段的克隆进行测序和同源性分析,鉴定了36种蛋白的基因片段,包括抗菌肽、酶、核糖体蛋白、其他功能蛋白以及功能不明的蛋白。用半定量RT-PCR分析了其中6种蛋白基因的表达,结果显示:防御素和攻击素基因在细菌刺激后24h内明显上调表达,而溶菌酶、酚氧化酶原活化因子、糜蛋白酶和蛋白质合成起始因子基因在细菌刺激后0-4h内表达受抑制,12h后上调表达。该研究结果为家蝇免疫相关基因的克隆和家蝇免疫防御机制的探讨奠定了良好的基础。
- 李殿香康翠洁张伟王金星赵小凡
- 关键词：家蝇抑制性消减杂交CDNA消减文库差异表达基因半定量RT-PCR
