广东省医学科学技术研究基金(A2013755)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：原向伟黄秀芳梁胜根陈忠羡廖威明更多>>
- 相关机构：中山大学江门市中心医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金江门市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- α干扰素增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡被引量：1
- 2014年
- 目的探讨α干扰素（Interferonα，IFNα）联合化疗药物阿霉素诱导人骨肉瘤U20S细胞凋亡的作用及其机制，为提高骨肉瘤化疗敏感性探索新的治疗方法。方法应用台盼蓝拒染法测定IFNα和阿霉素单用以及联用对U20S细胞的生长抑制作用；Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化；Westernblot法检测Caspase-3、PARP的活化；采用Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理各组细胞，检测该作用是否依赖Caspase。结果IFNα处理24h、48h、72h对U20S细胞无抑制作用，却明显增强阿霉素诱导的生长抑制作用，具有时间依赖性；联合用药72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡形态学变化；联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、PARP均发生断裂活化；Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理明显减弱联合用药引起的生长抑制。结论IFNd通过Caspase依赖性凋亡通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤U2OS细胞生长抑制和凋亡，二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。
- 黄秀芳原向伟
- 关键词：Α干扰素阿霉素骨肉瘤凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶
- 抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 在不表达p14ARF的MG63细胞（p53突变）中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株MG63-ARF;经反向聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法鉴定;使用顺铂处理MG63和MG63-ARF细胞,通过MTT法测定细胞生长抑制和IC50;采用流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;采用免疫印迹检测p53、Bax、p21、Mdm2、Fas、Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达;通过RNA干扰进行p53的表达沉默.采用Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理各组细胞,检测该作用是否依赖Caspase-9.结果 mRNA和蛋白水平,MG63和MG63-vec细胞未见p14ARF表达,MG63-ARF细胞可见p14ARF的高表达.经顺铂处理72 h后,细胞活力在MG63、MG63-vec和MG63-ARF组为84.2％±4.3％、80.8％±4.3％和58.9％±5.4％,IC50值为（11.1±0.6）、（10.7±0.9）、（7.2±0.7） μmol/L,（P＜0.05）.流式细胞术显示MG63、MG63-vec和MG63-ARF组经顺铂处理72 h的凋亡率为：13.6％、18.5％和35.9％.荧光染色表明MG63-ARF细胞相对出现更多更明显的凋亡,在MG63-ARF还出现了更明显的Caspase-3,9和PARP的活化裂解.在顺铂处理的MG63-vec和MG63-ARF细胞中,p53、Bax、p21、Mdm2、Fas的表达无任何改变.在U2OS-vec和U2OS-ARF细胞中转染p53-siRNA明显减弱了p53的表达,再经顺铂处理72 h后,U2OS-vec细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义（P＞0.05）,U2OS-ARF细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义（P＞0.05）.Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理后,Z-LEHD-FMK、顺铂、顺铂＋Z-LEHD-FMK组细胞活力为：96.8％±3.6％、54.1％±5.8％和89.5％±5.1％.结论 p14ARF可通过p53非依赖Caspase-9依赖性途径增强顺铂诱导的骨肉瘤MG63细胞凋亡,该作用与内源性线粒体凋亡通路有关.
- 黄秀芳原向伟陈忠羡梁胜根
- 关键词：骨肉瘤顺铂
- 干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞
- 2018年
- 目的探讨干扰素（IFN）-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制。方法采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U2OS细胞72 h，通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率，应用流式细胞术检测细胞周期停滞，通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测p53在mRNA水平的表达，通过小干扰RNA（siRNA）干扰沉默p53的表达，采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果药物处理72 h，IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为：（2.29±1.03）%、（23.85±3.09）%和（50.51±3.77）%，IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.008）。在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变。足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为（19.68±3.62）%和（11.33±2.94）%，G2/M期细胞为（65.02±2.55）%和（76.09±2.87）%，两者组间差异有统计学意义（P＝0.037）。IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达，但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为：（55.72±3.88）%、（51.63±4.36）%和（36.40±3.95）%，p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.023），同时联合用药组的PARP裂解明显减弱。泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α＋足叶乙甙组、足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组和IFN-α＋足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组的生长抑制率为（3.52±1.98）%、（27.11±4.06）%、（56.44±4.78）%、（21.37±3.55）%、（23.81±4.22）%。Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.015），并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱。结论IFN-α在人骨肉瘤U2OS细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡，该作用依赖p53和Ca
- 原向伟黄秀芳陈忠羡梁胜根秦英向珊珊廖威明
- 关键词：干扰素-Α足叶乙甙骨肉瘤凋亡
