国家自然科学基金(81270750)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：麦庆云周灿权李宇彬李涛曾艳红更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院广州中医药大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 废弃胚胎来源的单个卵裂球的发育规律
- 2014年
- 目的通过对单个卵裂球的体外培养发育的观察,评估其细胞增殖、囊胚形成以及细胞发育分化。方法收集临床体外受精周期中第3天新鲜废弃胚胎,分离单个卵裂球后即移至囊胚培养液中培养。观察卵裂球的生长情况,分析体外发育单个卵裂球的增殖情况、囊胚的形成时间以及效率,并对形成的囊胚进行细胞染色计数,总结单个卵裂球体外培养的发育规律;并且通过免疫荧光检测囊胚的多能性标记物Oct3/4的表达,初步探讨单个卵裂球的发育极性。结果收集第3天新鲜废弃胚胎,共分离并进入研究的单个卵裂球596个,卵裂球形成细胞融合在分离后的48h,囊胚形成则在分离后的72 h,而且生成的囊胚体积较小,大部分内细胞团结构不明显,卵裂球增殖率分别34.1%;囊胚形成率为8.6%,而同期收集的废弃胚胎的囊胚形成率为28.7%,组间差异有统计学意义（P〈0.001）;对分离卵裂球培养第4天形成的囊胚进行细胞计数,中位细胞数为24.6;对所形成的囊胚分析Oct3/4的表达发现,只有25.0%囊胚可表达多能性标志物（Oct3/4）,而且囊胚表达多能性标记物的细胞数很少（2-5个）。结论普通胚胎发育规律比较,单个卵裂球的囊胚形成时间延迟1d,囊胚形成率较未分离的废弃胚胎低下;而且单个卵裂球的分离培养可能对细胞的全能性或者极性发育存在负面的影响。
- 黄孙兴丁晨晖麦庆云徐艳文周灿权
- 关键词：囊胚
- 宿主状态对人卵巢组织异种皮下移植的影响被引量：1
- 2013年
- 【目的】探讨异种移植宿主状态对解冻后人类卵巢组织皮下移植效果的影响。【方法】利用解冻后的人类卵巢组织片进行SCID小鼠皮下移植。按照卵巢组织在宿主不同的性别、去势以及局部创伤情况分为六组,观察移植后人类卵巢组织片中卵泡存活、生长、凋亡以及间质重构等情况。【结果】各组原始卵泡存活率与解冻后未移植组织相比明显下降(P<0.05)。六组间比较,移植后第一周原始卵泡形态正常率差别有统计学意义(P=0.046),无菌创伤雄性小鼠组最高(64.6%),完整雌性小鼠组最低(39.7%)。性别、去势情况对移植后一周原始卵泡形态正常率无明显影响,差别无统计学意义(P均>0.05)。异种移植10周中,随移植时间推移,生长期的卵泡百分比明显增加(P均<0.05);而六组间比较,不同时间点差别都没有统计学意义(P均>0.05)。移植后组织中的Ki-67和TUNEL原位杂交表达情况与解冻组织相似,而MMP-9的表达在间质中显得更加广泛。经过10周的SCID小鼠异种移植后,有肉眼可见小窦卵泡形成。【结论】人类卵巢组织异种皮下移植后能存活并生长,但有着不一样的间质重构;宿主性别和去势情况对10周移植效果影响不大,局部无菌性创口可改善卵泡存活率。
- 李宇彬麦庆云李涛周灿权
- 关键词：异种移植卵泡间质重构
- 一种高效的β地中海贫血CD17(A>T)点突变293T细胞系的建立
- 2022年
- 目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17(A>T)点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术,即无痕基因组编辑(consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT),通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割,同时以引入有CD17(A>T)点突变和同义突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(singlestranded oligo DNA nucleotides, ssODNs)作为同源模板进行重组,经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因(HBB)点突变CD17(A>T)基因型HEK293T细胞系。结果 利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17(A>T)基因型点突变的HEK293T细胞系,同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑,提高单碱基突变效率。结论 通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系,对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。
- 刘永祥蔡炳许言曾艳红周少虎麦庆云
- 关键词：地中海贫血单碱基突变
- 卵巢低反应人群用药技巧被引量：1
- 2017年
- 卵巢低反应(POR)即在控制性促排卵中卵巢对外源性促性腺素刺激反应不良的状态,在临床中极为常见。目前临床上POR诊断常采用博洛尼亚标准,但该标准仍然具有局限性。本文介绍了目前文献报道常用的POR人群用药方案与相关的辅助治疗,但现有POR相关的研究仍普遍存在纳入标准不一、样本量小等问题,因此尚未有一种受到学界广泛认可的干预措施可改善POR患者的妊娠结局。未来需要在完善、细化博洛尼亚标准的前提下,进行大样本、多中心的随机对照实验及合理、严谨的大数据荟萃分析,以求获得可有效地改善POR患者生育结局的干预手段。
- 黄可珺麦庆云
- 关键词：卵巢低反应促排卵
- G蛋白偶联受体抑制剂与成人卵巢组织体外共培养通过抑制HIPPO-YAP信号通路促进始基卵泡募集
- 2022年
- 目的本研究观察G蛋白偶联受体抑制剂溶血磷脂酸(LPA)及1-磷酸硝氨醇(S1P)与成人卵巢组织共培养后Hippo-YAP信号通路各元件及下游蛋白因子的表达及卵巢组织中卵泡发育相关标记的变化,探讨其通过Hippo-YAP信号通路调控始基卵泡募集的作用。方法收集中山大学附属第一医院2017年3月-2017年11月妇科手术切除的正常成人卵巢组织,通过WB、ELISA等方法检测分别经GPCRs抑制剂共培养、机械卵巢组织碎片化及其与Akt通路激活剂共培养结合使用后组织中通路各元件及下游蛋白因子的表达及培养液中卵泡发育相关指标的浓度,观察不同处理方式对Hippo-YAP通路抑制效应及对卵巢内卵泡募集的效果。结果(1)成人卵巢皮质组织使用5μmol/L LPA及5μmol/L S1P联合培养体系共培养8h左右可获得较明显的Hippo-YAP通路效应因子CCN2的表达促进效果(P<0.01);(2)正常成人卵巢皮质组织中,AKT信号通路激活剂共培养48 h后与LPA及S1P共培养8 h可获得与目前体外卵泡激活标准的“机械碎片化HIPPO-YAP信号通路抑制法+AKT信号通路激活剂共培养48 h”方案相接近的HIPPO-YAP信号通路主要元件YAP的磷酸化抑制及下游效应因子CCN2表达增加效应(P>0.5)。结论(1)GPCRs抑制剂LPA及S1P共培养后在人卵巢组织呈现Hippo-YAP通路抑制效应;(2)在体外培养体系中,人卵巢皮质组织以5μmol/L LPA及5μmol/L S1P组成的总浓度为10μmol/L的GPCRs抑制剂处理,培养24 h后可获得较佳的Hippo-YAP通路抑制效应,但Hippo-YAP信号通路抑制产生的促卵巢组织生长的效应在通路抑制效应后仍可能持续存在。
- 黄可珺麦庆云
