江苏省高校自然科学研究项目(13KJA220004)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 相关作者：赵林果李琦姚华曹云峰刘祝兰更多>>
- 相关机构：南京林业大学南京师范大学江苏农林职业技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 木聚糖酶XynB分子Ser/Thr平面导入精氨酸对酶热稳定性的影响被引量：1
- 2014年
- 为提高木聚糖酶的热稳定性,通过定点突变的方法,在来源于黑曲霉Aspergillus niger nl-1的木聚糖酶XynB分子Ser/Thr平面上引入5个精氨酸,实现了突变酶在毕赤酵母中的表达。通过酶学性质的研究表明,突变酶XynB-104和XynB-77的最适反应温度为50℃,且与原酶相比相对酶活力得到显著提高。在存在底物的情况下,50℃热处理2 h,突变酶XynB-104和XynB-77残余酶活力较原酶的相对转化效率由26%提高到80%左右。突变酶XynB-104的最适反应pH与原酶一致,而突变酶XynB-77最适pH由5.0提高到5.5。结果表明,在木聚糖酶分子Ser/Thr平面不同折叠片引入精氨酸可以增强酶结构的稳定性,特别是能显著提高热稳定性。
- 李飞解静聪李琦张雪松赵林果
- 关键词：定点突变木聚糖酶精氨酸热稳定性
- Thermoanaerobacterium saccharolyticum JW/SL-YS485来源的GH11家族木聚糖酶的克隆表达及其应用被引量：2
- 2018年
- 对Thermoanaerobacterium saccharolyticum JW/SL-YS485来源的GH11家族木聚糖酶基因xyn11进行了克隆表达研究。xyn11基因全长636bp,编码211氨基酸。通过构建重组质粒,使其在大肠杆菌中实现了活性表达,酶活达到13.8U/mL。重组酶通过热处理和Ni亲和层析达到电泳纯,SDS-PAGE显示其分子量为20000,与理论分子量吻合。重组酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH为4.5,在pH 3.5~6.0范围内保持较高的稳定性,60℃保温1h,酶活还残存60%,Cu^(2+)对该酶有激活作用。重组酶底物特异性强,且不能降解木二糖和木三糖。重组酶以榉木木聚糖为底物,其V_(max)和K_m分别为9809U/mg和5.9mg/mL。榉木木聚糖质量浓度为25g/L,重组木聚糖酶用量为20U/g,在50℃、pH 4.5条件下水解12h低聚木糖的得率为27.8%,水解产物主要由木二糖和木三糖组成,且不产生任何木糖。结果表明,该木聚糖酶催化特性优异,可用于低聚木糖的制备。
- 裴建军李杰李琦李琦
- 关键词：木聚糖酶低聚木糖
- 耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在酶解玉米芯木聚糖中的应用被引量：7
- 2017年
- 为寻求具有耐热性能的木聚糖酶,笔者以嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)DSM3960的基因组为模板,克隆得到木聚糖酶基因xyn B-DT,该基因全长1 083 bp,共编码361个氨基酸,蛋白的理论分子量约为40ku。通过NCBI数据库比对发现该基因编码的蛋白质属于糖苷水解酶G11家族。实现大肠杆菌异源表达重组木聚糖酶Xyn B-DT,通过IPTG诱导,酶活达到30.6 U/mL。该重组木聚糖酶的最适温度为85℃,在60~80℃范围内均有较好温度稳定性,在60℃条件下保温2 h,酶活维持在90%以上,在90℃下保温2 h,酶活尚残余约50%;最适pH为6.5,在pH为5.0~7.5范围内保温24 h仍可保留约90%剩余酶活力。该酶以Beechwood木聚糖为底物,米氏常数(K_m)和最大反应速率(V_(max))值分别为5.63 mg/mL和1.572 mmol/(L·min^(-1))。以玉米芯木聚糖为底物,研究XynB-DT水解玉米芯木聚糖的条件及产物,结果显示在温度70℃、pH 6.0条件下酶解12 h,加酶量为400 U/g,最终酶解得率为44.3%,玉米芯木聚糖的水解产物主要以木二糖和木三糖为主,表明该木聚糖酶在低聚木糖制备方面具有较大应用潜能。
- 李琦陈明真赵林果
- 关键词：木聚糖酶克隆
- 高产木聚糖酶对废新闻纸脱墨的补偿工艺研究被引量：1
- 2017年
- 为探讨实验室培养高产木聚糖酶(酶活1 792.67 IU/mL)在废新闻纸脱墨中的环境适应能力,在木聚糖酶脱墨适宜工艺基础上进行了酶用量补偿研究。研究发现,酶脱墨适宜条件为:酶用量5.0 IU/g、酶处理时间50 min、反应温度45℃、反应pH值5.0,此时脱墨浆料白度可提高2.04%ISO,残余油墨面积降低了17 324 mm^2/m^2。通过增加酶用量的方式来补偿实际应用中由于低温高碱环境对酶活造成的损失,研究结果表明在脱墨温度为20℃、pH值为7.0时的脱墨浆白度仍可提高1.94%ISO,残余油墨面积降低了17 546 mm^2/m^2,达到适宜脱墨工艺条件下的脱墨效果。
- 姚华刘祝兰曹云峰赵林果
- 关键词：废新闻纸脱墨
- 纤维素内切酶预处理对浆料打浆性能的影响被引量：2
- 2018年
- 通过单因素变量分析纤维素内切酶预处理桉木浆和苇浆的效果,优选酶预处理最佳工艺。结果表明,纤维素内切酶预处理桉木浆的最佳工艺条件为:酶用量3.0I U/g,预处理时间2h,温度50℃,pH值7.5;预处理苇浆的最佳工艺条件为:酶用量1.0I U/g,预处理时间1h,温度50℃,p H值7.5。与原浆相比,在最佳工艺条件下,酶预处理桉木浆打浆度提高7.4°SR,苇浆打浆度降低3.1°SR。酶预处理过程中,桉木浆和苇浆中细小组分含量降低,纤维平均长度增加,桉木浆和苇浆纤维得以软化。经PFI磨浆后纤维表面分丝帚化程度加强,打浆效果显著改善,成纸抗张强度和耐破强度提高。
- 刘祝兰姚华曹云峰赵林果
- 关键词：酶预处理桉木浆苇浆
- 响应面法优化毕赤酵母基因工程菌表达木聚糖酶条件研究被引量：5
- 2016年
- 木聚糖酶作为降解木聚糖的关键酶之一,在制药、纸浆造纸和食品等领域有着广泛的应用。为了进一步提高重组毕赤酵母基因工程菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达产木聚糖酶的能力,采用响应面法对其发酵条件进行优化。先通过Plackett-Burman法筛选出3个对产酶有显著影响的重要因素,分别为初始pH、组氨酸添加量和甲醇添加量;再利用单因素法逼近最大响应区域,并结合Box-Behnken试验获得最优的发酵条件为初始pH 58、组氨酸添加量06%、甲醇添加量085%。在最优的发酵条件下,重组菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达木聚糖酶酶活达到3 604 U/mL,较未优化前提高了256倍,其3组平行试验值与模型的预测值基本相符,说明预测模型的可信度高,研究结果能为建立重组菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达木聚糖酶的制备工艺提供依据。
- 杨诗逸李琦奚丽娅陈明真赵林果
- 关键词：木聚糖酶响应面法发酵条件优化
- 高产木聚糖酶对废新闻纸脱墨的补偿工艺研究
- 2017年
- 为探讨实验室培养高产木聚糖酶（酶活1792．67IU／mL）在废新闻纸脱墨中的环境适应能力，在木聚糖酶脱墨适宜工艺基础上进行了酶用量补偿研究。研究发现，酶脱墨适宜条件为：酶用量5．0IU／g、酶处理时间50min、反应温度45％、反应pH值5．0，此时脱墨浆料白度可提高2．04％IS0，残余油墨面积降低了17324mm2／m2。通过增加酶用量的方式来补偿实际应用中由于低温、高碱环境对酶活造成的损失，研究结果表明在脱墨温度为20℃、pH值为7．0时的脱墨浆白度仍可提高1．94％IS0，残余油墨面积降低了17546mm2／m2，达到适宜脱墨工艺条件下的脱墨效果。
- 姚华刘祝兰曹云峰赵林果
- 关键词：废新闻纸脱墨
