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国家自然科学基金(31272535): 作品数：11 被引量：87H指数：4; 相关作者：尹燕博张毅王建琳毕玉海徐守振更多>>; 相关机构：青岛农业大学中国科学院中国动物卫生与流行病学中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2016年; 为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。; 曹志伟孙忠晟郭学金王建琳尹燕博; 关键词：IFN-Α IFN-Β

山东省部分地区鸡源大肠杆菌与低致病性H9亚型禽流感病毒混合感染的调查被引量：8: 2016年; 为了解近年来山东省鸡大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒混合感染的情况,对2012年1月份至2014年3月份期间山东省部分地区送检的1 816份病料进行研究,通过大肠杆菌的分离鉴定和H9亚型禽流感病毒的血凝抑制试验,结果分离出大肠杆菌116例,占总病料的6.39%;检出H9亚型禽流感病毒495例,占总病料的27.26%;检出大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染46例,占总病料的2.53%;且混合感染检出率在第一、四季度较高;青岛、聊城地区大肠杆菌与H9亚型禽流感混合感染检出率高于潍坊和烟台。调查结果表明临床鸡大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染现象比较普遍,严重威胁着山东地区养殖业的发展。; 刘香敏纪鸿翔王建琳尹燕博; 关键词：H9亚型禽流感病毒鸡大肠杆菌

2008年~2012年山东胶东鸡场NDVIBVAIV（H9）感染情况调查被引量：3: 2013年; 为了解2008年1月～2012年6月山东胶东青岛、潍坊和烟台三地区新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和H9亚型禽流感病毒（AIV（H9））的感染情况，采用RT—PCR对送检的5001份患有呼吸道症状的病料进行了检测。结果显示，3地区3种病毒的总阳性率为48．49％，其中AIV（H9）感染率最高，为26．15％。青岛地区NDV和IBV的阳性率均最高，分别为15．94％和11．63％，潍坊地区AIV（H9）阳性率最高（29．23％）。4年半间AIV（Hg）感染下降明显，但NDV近3年感染明显抬头。寒冷月份3种病毒感染较高，3月份NDV和AIV（H9）阳性率均最高，分别为21．07％和38．17％；10月份1BV阳性率最高为15．40％。3种病毒混合感染阳性率为6．66oA，以NDV＋AIV（H9）二重感染最常见（2．98％），NDV＋IBV＋AIV（H9）三重感染为0．40％。结果表明，山东胶东地区NDV、IBV和AIV（Hg）的感染情况较普遍，存在一定程度的混合感染，为有效防控山东省规模鸡场该3种主要疾病提供了依据。; 徐守振郭妍妍卢春晓韩丽敏尹燕博; 关键词：RT-PCR

2010—2014年山东H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及HA和NA基因序列分析被引量：3: 2016年; 旨在了解山东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行和遗传变异情况,为该地区H9N2亚型禽流感的防制提供依据。通过鸡胚接种的方法从山东省分离到1 296株H9N2AIV,并选取40株对其进行HA和NA基因的扩增、测序及遗传进化分析。结果显示,2013年H9N2AIV的分离率最高,达42.30%;40株病毒的HA和NA的核苷酸序列同源性及推导的氨基酸相似性均在90%以上;HA裂解位点序列为PSRSSR↓GLF,NA颈部缺失3个氨基酸;HA和NA均存在糖基化位点的缺失和新的糖基化位点出现;大部分毒株发生了易于感染人型受体的突变;演化分析表明40株病毒的HA和NA基因均属于Y280-like亚分支。结果提示,H9N2AIV在山东省各地区普遍流行且在2013年达到高峰,所有毒株均符合低致病性禽流感病毒的分子特征,并且具有结合哺乳动物唾液腺受体的能力,因此应密切关注H9N2病原出现的新变化,制定相应的防控措施。; 王冬冬张毅侯广宇刘永举刘朔蒋文明李金平于建敏范丹丹陈文雅王守春尹燕博陈继明; 关键词：H9N2 禽流感病毒 HA NA

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡主要细胞因子的表达: <正>1、研究目的:本研究拟用筛选的不同致病性H9N2亚型禽流感病毒毒株(C/SD/196/11和C/SD/818/10)感染SPF鸡,应用实时荧光定量RT-PCR方法对鸡IFN-α、TNF-α和H9N2亚型禽流感病毒进...; 曹志伟朱梅胜王建琳尹燕博; 文献传递

两株不同致病力H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析被引量：5: 2015年; 为了找到H9N2亚型禽流感病毒毒株致病力增强的分子线索,对致病力存在明显差异的2株H9N2亚型禽流感病毒进行了全基因组序列测定和分析。遗传进化分析表明,2株H9N2亚型禽流感病毒发生了基因重配,内部基因来源具有多样性。氨基酸序列分析表明,强致病力毒株A/chicken/Shandong/818/2010和A/chicken/Shandong/196/2011在HA受体结合位点、NA唾液酸结合位点和潜在糖基化位点处存在显著差异,SD/818在PA蛋白55位氨基酸和336位氨基酸等重要功能位点处出现了与致病力增强有关的突变,这种致病力增强的分子机制需要进一步探究。; 刘琳琳张毅郭学金范丹丹朱梅胜王守春徐守振王建琳毕玉海尹燕博; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒致病力全基因遗传进化

2007年～2010年H9N2亚型禽流感病毒分离株对SPF鸡的致病特性研究被引量：5: 2013年; 本研究对2007年～2010年我国H9N2亚型禽流感病毒分离株的鸡胚平均死亡时间(MDT)进行分析,发现自2008年下半年来分离的H9N2亚型禽流感病毒对鸡胚的致病性有增强的趋势,在此基础上,选择MDT在60.5～96.3h之间的9株病毒,比较其对SPF鸡的致病力。结果表明,对鸡胚致病性强的毒株,对SPF鸡的致病性也较强,能引起气管、肺、十二指肠、肾和脑等多器官的系统性感染,而且病毒在各组织器官的复制能力与致病性呈正相关。在感染SPF鸡后,所有毒株均呈现不同程度的排毒,而致病力较强毒株的感染组,排毒的比例更高,排毒时间也更长。这些数据表明,H9N2病毒在进化过程中,致病力发生了一定的变化,新近出现了一些对鸡致病力增强的毒株,这提示我们必须重视对H9N2病毒进化和变异的监测,加强对H9N2病毒的防控。; 王守春张毅卢春晓王晓红徐守振王建琳李海英周顺王光郭妍妍毕玉海尹燕博; 关键词：H9N2亚型禽流感 SPF鸡

我国禽流感研究进展及成就被引量：63: 2014年; 禽流感不仅严重危害养禽业,而且给公共卫生造成巨大威胁。为了科学认识和积极防控禽流感,我国科学家进行了大量且富有成效的研究,取得了举世瞩目的成果。通过长期的监测,基本掌握了禽流感在我国的流行情况和进化规律;利用反向遗传操作技术和蛋白质组学技术,发现了影响流感病毒致病力、传播力和受体结合能力的部分关键位点,阐释了其作用机制;通过对传统技术的改进和先进方法的应用,不断成功建立禽流感诊断、检测技术;新型禽流感疫苗不断涌现并逐步被推广和应用,取得了良好的免疫效果。上述成果为我国禽流感的防控奠定了良好的基础,也为后续研究提供了依据。但是禽流感的防控形势依然严峻,2013年新型H7N9病毒的出现,使禽流感的防控面临新的挑战。; 张毅王幼明王芳王静静毕玉海尹燕博丁家波; 关键词：禽流感致病机制

H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术的建立与应用: 2014年; 为建立H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,参考Gen Bank登录的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计3对可扩增HA、NA、M基因的特异性引物以及反转录引物。3对引物扩增的c DNA片段大小分别为1 742、1 410、1 027 bp。结果:通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,与目的片段大小相符的片段,经测序均正确,且与其他常见禽病病原不存在交叉反应。该方法对HA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对NA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对M基因的最低检出量为10-3μg/μL c DNA。通过对30份H9N2阳性病毒液进行三重PCR,均可同时扩出HA、NA、M基因。结果表明,本试验建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,为提高H9N2亚型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基础。; 陈欣尹燕博张乐萃卢春晓; 关键词：H9N2亚型禽流感 HA基因 NA基因 M基因

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异被引量：3: 2017年; 本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PBS、105 EID50毒株SD/196和SD/818各0.2mL,分别于接种后的第1、3、5、7和10天每组剖杀8只,收集具有明显病变差异的组织;180枚10日龄SPF鸡胚分别尿囊腔接种PBS、104 EID50的SD/196毒株和SD/818毒株各0.1mL,分别于接种后的第4、8、16、24、32和48小时每组收集胚体10个;鸡胚成纤维细胞分别接种PBS、SD/196和SD/818毒株病毒液(1moi)进行37℃培养,于感染后的第4、8、16、24、32和48小时收集细胞;动态收集的病变组织、胚体和成纤维细胞通过荧光定量PCR测定TLR-7和Mx基因mRNA水平的表达。结果显示,肺、肾、十二指肠和法氏囊为主要病变差异组织,除鸡胚TLR-7的表达外,毒株SD/818大部分时间点诱导主要病变差异组织、鸡胚和成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达显著高于毒株SD/196(P<0.05)。结果表明不同致病性H9N2亚型禽流感病毒明显诱导了SPF鸡主要病变差异组织、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达,且较高致病性毒株SD/818诱导表达量明显高于较低致病性毒株SD/196。; 王建琳曹志伟王冬冬尹燕博; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 SPF鸡

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