北京市属高等学校人才强教计划资助项目(2007)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
- 2008年
- 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。
- 王霞泰汤世坤周双海刘凤华
- 关键词：IL-18
- 猪圆环病毒2型北京株全基因组的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 为探索近年来北京地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学和变异规律,用PCR技术从北京不同猪场的临床发病猪和死亡猪病变组织中分别扩增和克隆获得4株PCV2分离株全基因组序列,并进行测定和分析。结果显示,4株PCV2基因组全长均为1 767 nt,其核苷酸同源性高达99%,与其他北京分离株的同源性也达98%以上,与国内外其他地区PCV2的核苷酸同源性也在95%以上。由此表明,各个PCV2分离株在进化方面存在地域相关性。
- 汤世坤张雪周双海王霞泰吴国娟
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组克隆
- 猪GM-CSF荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 根据GenBank中猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296 bp cDNA片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM-CSF cDNA部分片段的重组质粒。通过重组质粒的Real-time PCR方法,建立了猪GM-CSF cDNA的Re-al-time PCR标准曲线及其直线回归方程。该方法重复性好,敏感性高、特异性强,可用于猪GM-CSF mRNA水平的定量检测。
- 王霞泰蒋伟娇周双海汤世坤刘凤华
- 关键词：GM-CSF荧光定量PCR
