国家自然科学基金(31272564)
- 作品数：22 被引量：34H指数：3
- 相关作者：张桂红冯松林赵孟孟王文佳曹宗喜更多>>
- 相关机构：华南农业大学河南农业大学河南牧业经济学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 2015～2017年华南地区PCV2和PCV3分子流行病学调查及PCV3实时荧光定量PCR方法的建立
- 猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)是一种无囊膜的环状DNA病毒,目前已鉴定存在三种不同型的猪圆环病毒,分别是PCV1、PCV2和PCV3。PCV1被认为对猪无致病性,而PCV2是生猪产业中重要的病...
- 刘乙兴
- 关键词：猪圆环病毒2型分子流行病学遗传进化
- 文献传递
- 针对nsp9基因的siRNA在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3
- 2017年
- 为了验证猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp9基因对PRRSV的复制影响,化学合成针对nsp9基因的siRNA,转染到Marc-145细胞中,接种PRRSV之后分别通过荧光定量和Western blot方法来测定病毒的滴度变化和表达情况。结果发现,转染siRNA的Marc-145细胞中病毒的滴度低于未转染特定siRNA的对照组,同时N蛋白的mRNA和蛋白水平均低于未转染特定siRNA的对照组。初步得出结论nsp9基因为病毒复制关键基因,针对nsp9基因的siRNA会在Marc-145细胞中抑制PRRSV的复制。
- 赵孟孟李华玮何健冯松林张雅张二芹张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒SIRNA滴度
- Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化被引量：3
- 2016年
- 试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSV Nsp9基因序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量PCR。结果显示,PRRSV Nsp9基因在1×104~1×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰,无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒（HEV）、猪流感病毒（SIV）、伪狂犬病病毒（PRV）基因组均无交叉反应,可重复性好,组内变异系数小,可用于临床PRRSV检测。在病毒感染细胞过程中,Nsp9基因表达量逐步升高,36h达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。
- 赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造被引量：2
- 2016年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传学技术将PRRSV弱毒疫苗毒CH-1R的Nsp9基因进行克隆,酶切后连接到强毒株XH-GD的感染性克隆上,进行病毒的拯救。结果表明,成功构建替换了CH-1RNsp9基因的重组病毒。对重组病毒的生物学特性研究发现,拯救病毒的生长速度和病毒滴度明显高于亲本毒株rXH-GD,但是低于疫苗毒CH-1R,重组毒株的噬斑大小与CH-1R相似,初步推测疫苗株CH-1R的聚合酶有助于提高病毒的滴度。本试验为进一步研究Nsp9基因对病毒毒力的影响奠定基础。
- 赵孟孟钱娟娟崔甜甜冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传学病毒拯救
- 2017年福建地区PRRSV分子检测及ORF5基因变异分析被引量：2
- 2019年
- 【目的】研究2017年福建地区中小规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的分子流行情况。【方法】从福建地区中小规模猪场收集83份疑似蓝耳阳性病料,对编码GP5蛋白的ORF5基因进行了RT-PCR检测和遗传进化分析。【结果】采集的83份疑似蓝耳病料中阳性率为73%,测得的序列之间ORF5的核苷酸相似性达80.3%～100.0%,其中所测的各个分支毒株与其所属分支的代表毒株NADC30、GM2和JXA1的核苷酸相似性分别为92.6%～93.9%、89.8%～93.0%和93.4%～99.3%,检测到新分支中新出现的毒株与JXA1的核苷酸相似性为91.0～93.0%。GP5氨基酸比对结果显示不同亚群GP5信号肽区、诱导表位、主要中和表位及高变区等功能区发生了显著变异。【结论】福建地区出现了PRRSV新分支,使福建PRRSV变异种类更加多样化,建议加强PRRSV流行及变异的监测。
- 韦应芳冀池海孙彦阔韩晓亮陈尧张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征蓝耳病ORF5基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2016年
- 为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp9基因的功能进行预测,利用RT-PCR法从细胞毒中扩增PRRSV FS株的Nsp9基因,并将其克隆至pMD18-T载体上,测序得到Nsp9基因序列,利用多种生物信息学软件分析Nsp9序列生物学信息。结果显示,Nsp9基因全长1 929bp,目的基因的蛋白分子质量为70.5ku,pI为7.78,表明该蛋白不稳定;抗原性分析显示,Nsp9基因存在多个抗原位点,柔韧性较好,多处位点的亲水性较强,适合作为单抗制备的表位;同种亚型不同毒株的Nsp9基因氨基酸同源性为96.9%~98.9%,这表明Nsp9基因高度保守,可进一步作为检测靶蛋白用于猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的诊断与疫苗免疫;亚细胞定位预测该基因可能定位于细胞质中,而不是细胞核内;同源建模预测三级结构结果显示,三维结构呈右手型,具有3个亚结构域,没有信号肽。此外,亲本株Nsp9基因与疫苗株Nsp9基因存在多个氨基酸的突变,这些氨基酸的插入与缺失是否与病毒的聚合酶活性和毒力有关还需要进一步试验验证。
- 赵孟孟宋中宝冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒克隆
- 影响PRRSV细胞嗜性关键氨基酸位点的研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是引起全球性动物流行病猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的病原体。近年来我国PRRSV的毒株流行情况变得越来越复杂,基因组变异加快,毒株出现重组突变,相继出现变异毒株HP-PRRSV、NA...
- 李琪
- 关键词：PRRSV细胞嗜性
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定被引量：2
- 2016年
- 根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。
- 赵孟孟张二芹冯松林郭依嘉阮海宇王文佳邢星张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体杂交瘤
- 基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3
- 2016年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,将PRRSV全基因组分6段克隆,构建获得6个重组质粒,先由A1和A2片段或B1和B2片段连接构成A片段或B片段,然后D、C、B和A片段依次亚克隆入pOKq载体。在基因组5′端和3′端分别加上CMV启动子序列和BGH终止信号肽,全基因组510位核苷酸突变引入遗传标记位点FseⅠ。测序正确的全基因组质粒命名为pOK-A2BCD。再将pOK-A2BCD质粒转染BHK-21细胞,拯救病毒通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,结果表明拯救病毒成功,为进一步研究PRRSV致病性等相关分子机制奠定了基础。
- 曹宗喜焦培荣谭树义叶保国亓文宝张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒CD163受体功能域鉴定被引量：2
- 2016年
- 猪繁殖与呼吸综合征是危害养猪业重要传染病之一,CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染易感细胞受体。研究表明CD163受体的前2个SRCR区域与PRRSV感染无关。为确定PRRSV感染细胞过程中CD163受体关键SRCR区域,构建表达野生型CD163受体和缺失不同个数SRCR区域的CD163受体突变体质粒。将质粒转染BHK-21细胞24 h后,XH-GD株PRRSV感染细胞,进行间接免疫荧光(IFA)观察。结果显示,CD163前4个SRCR重复区缺失不影响PRRSV感染,SRCR5是PRRSV感染细胞所必须。为进一步研究CD163受体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用及与其他受体之间相互关系提供试验基础。
- 曹宗喜焦培荣林哲敏亓文宝张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒MARC-145细胞功能域
