国家自然科学基金(81272817)
- 作品数：9 被引量：23H指数：2
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- 肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4核定位信号的结构分析与功能鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的分析肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4(CXCR4)核定位信号序列的组成结构,并鉴定其功能。方法首先通过生物信息学方法检索Ensembl和PSORTⅡPrediction在线数据库,分析CXCR4核定位信号序列的组成和结构。然后根据生物信息学分析结果,通过重叠延伸聚合酶链反应和基因克隆技术构建含有CXCR4核定位信号序列突变基因与绿色荧光蛋白基因的融合基因质粒,并将其转染入肾癌细胞表达,在荧光和激光共聚焦显微镜下观察CXCR4核定位信号序列突变体蛋白的亚细胞分布情况。结果 CXCR4蛋白的核定位信号序列为其第146~149位氨基酸,组成为精氨酸-脯氨酸-精氨酸-赖氨酸(RPRK)。荧光和激光共聚焦显微镜下,核定位信号序列突变的CXCR4蛋白分布于肾癌细胞膜和细胞质,不再分布于细胞核,而野生型CXCR4蛋白除细胞膜和细胞质外,仍可分布于肾癌细胞核。结论 CXCR4蛋白的核定位信号序列确为其第146~149位氨基酸,该突变序列中任一碱性氨基酸位点均可导致CXCR4核分布能力丧失。
- 李鹏刘冰王志向鲍一陈俊明吴登爽吴震杰王林辉
- 关键词：肾细胞癌CXC趋化因子受体4亚细胞分布
- 趋化因子受体CXCR4在肾癌索拉非尼耐药中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨趋化因子受体CXCR4在肾癌索拉非尼治疗耐药中的作用及可能的机制。
方法2014年1月至2016年6月将肾癌细胞786－O接种于裸鼠前肋侧皮下荷瘤，每点5×106个细胞，在移植瘤体积约100 mm3时，将裸鼠分为对照组和索拉非尼组，每组3只。索拉非尼组予索拉非尼（80 mg/kg，1次/d）灌胃，对照组予等量生理盐水灌胃。对照组第5周肿瘤体积即超过1 500mm3，切取肿瘤作为对照组织；索拉非尼组第8周肿瘤开始加速生长，至第13周肿瘤体积超过1 500mm3，取第13周肿瘤作为耐药组织。采用实时定量PCR、蛋白质印迹和免疫组化法检测对照组织和耐药组织中CXCR4的表达量。构建pcDNA3.1－CXCR4质粒，将其转染至786－O细胞中过表达CXCR4，实时定量PCR和蛋白质印迹法测定过表达效果。使用CCK－8和单克隆形成实验检测细胞的药物反应性变化，比较对照组、过表达组和抑制剂组（CXCR4过表达＋CXCR4抑制剂AMD3100）的耐药性。蛋白质印迹法检测对照组、单用索拉非尼组、过表达CXCR4＋索拉非尼组及过表达CXCR4＋索拉非尼＋AMD3100组786－O细胞存活关键分子PKB、ERK、STAT3的磷酸化情况。
结果与对照组织相比，耐药组织CXCR4的mRNA水平升高（3.22±0.23）倍，蛋白质迹法检测结果显示蛋白表达量平均升高（2.33±0.47）倍，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。过表达CXCR4后，CXCR4的mRNA表达量升高了（78.3±5.3）倍，蛋白表达量升高了（2.80±0.95）倍，差异均有统计学意义（均P〈0.01），过表达模型构建成功。用CCK－8法测定对照组、过表达组和抑制剂组对索拉非尼的药物反应性曲线，计算出IC50分别为（7.5±0.8）、（10.3±0.7）、（5.7±0.6）μmol/L，差异有统计学意义（P〈0.05）。在索拉非尼7.5 μmol/L作用下，对照组、过表达组和抑制剂组形成的克隆数分别为（26±5）、（56±12）、（42±9）个，差�
- 鲍一刘冰吴震杰时佳子赵堂亮王安邦徐红王林辉
- 关键词：肾细胞癌趋化因子受体CXCR4索拉非尼耐药
- 专用超声在机器人辅助腹腔镜肾部分切除术中的应用初探被引量：7
- 2016年
- 目的：初步探讨专用超声在机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗完全内生型肾肿瘤中的临床应用价值。方法：2012年8月-2014年3月于长海医院采用机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗完全内生型肾肿瘤患者11例,术中应用机器人手术系统专用超声对肿瘤部位、大小、边界等进行实时监测,指导手术操作,并对手术切缘阳性率、手术时间、并发症、术后病理等指标进行评估。结果：所有患者均成功完成肾部分切除术,手术时间（232.5±41.2）min,术中出血量（127.3±57.9）ml,无一例输血;手术前后eGFR平均变化率为（-0.13±0.09）。术后1例患者出现肉眼血尿,其余无并发症发生,切缘阳性率为0。所有患者随访18-36个月,无一例肿瘤复发或转移。结论：机器人辅助腹腔镜肾部分切除术中,术者自己操作超声探头进行肿瘤定位、指导手术进行是安全可行的,而且能够增加操作的自主性、准确性,值得在临床上推广。
- 时佳子叶华茂徐志鹏吴震杰吕晨王林辉
- 关键词：肾肿瘤超声机器人手术系统肾部分切除术
- eEF1A1在T_1N_0M_0期肾癌中的表达及与预后的关系
- 2015年
- 目的探讨真核延伸因子1A1（eEF1A1）在T1N0M0期肾癌组织中的表达及其与预后的关系。方法收集第二军医大学长海医院泌尿外科在2007年行手术治疗的患者标本共70例。入选标准：术前未进行其他治疗,TNM分期为T1N0M0,行肾癌根治术,病理为透明细胞癌,患者及随访资料完整。通过免疫组化技术检测手术标本中癌组织eEF1A1的表达量,建立eEF1A1表达量与Fuhrman病理分级和预后之间的对应关系,绘制交叉表,通过χ2检验、Fisher精确概率法研究eEF1A1和肾癌Fuhrman病理分级的关系。通过绘制Kaplan-Meier生存曲线并进行log-rank检验研究eEF1A1和T1N0M0期肾癌预后的关系。结果随访时间为4~95个月,平均（77.9±18.3）个月,随访期内总生存率为88.6%,无进展生存率为80.0%。免疫组化显示eEF1A1在61.4%的肾癌组织中高表达,并且在高Fuhrman分级的肾癌组织中高表达（P=0.004）。生存分析提示肾癌组织低表达eEF1A1的患者生存期较长（P=0.019）,并且癌组织中低表达eEF1A1的患者均存活。结论 T1N0M0期肾癌组织中eEF1A1表达与肿瘤Fuhrman病理分级及患者预后有关,表达量低的患者预后较好。
- 鲍一王志向李鹏陈俊明刘冰杨庆高莉吴震杰王林辉
- 关键词：肾肿瘤肿瘤分期预后
- 趋化因子受体CXCR4核定位表达与肾癌转移及预后的相关性被引量：2
- 2015年
- 目的探讨肾癌组织趋化因子受体CXCR4核定位表达与肾癌转移及预后的相关性。方法采用免疫荧光染色法检测413例肾癌组织CXCR4的亚细胞定位表达,根据染色结果分为核定位阳性表达组及核定位阴性表达组,对比分析两组患者的临床资料及预后。结果 413例肾癌组织中170例CXCR4核定位阳性表达,243例CXCR4核定位阴性表达,两组基线资料差异无统计学意义。统计分析结果表明:与核定位阴性表达组相比,核定位阳性表达组Robson分期高、癌栓发生率高、淋巴结转移率高、远处转移率高,差异均有统计学意义(P<0.01)。核定位阳性表达组生存率为86.5%(147/170),低于核定位阴性表达组97.1%(236/243),差异有统计学意义(P<0.001)。结论肾癌组织中CXCR4核定位表达与Robson分期高、癌栓形成、淋巴结转移、远处转移及患者预后差相关。
- 叶学荣鲍一王志向刘冰宋尚卿曲乐陈俊明李鹏王林辉孙颖浩
- 关键词：CXCR4受体核定位肾肿瘤预后
- 机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗PADUA评分≥10分的肾脏肿瘤被引量：5
- 2014年
- 目的总结达芬奇机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗PADUA评分≥10分肾肿瘤的手术疗效,评估其安全性、可行性,探讨其潜在的临床应用价值。方法通过分析2012年5月至2013年9月长海医院同一术者完成的37例机器人辅助腹腔镜肾部分切除术治疗PADUA评分≥10分肾脏肿瘤患者资料,总结临床经验,评价手术疗效。本组患者男性21例,女性16例,年龄32-72岁,平均（52.3±10.1）岁;体质指数（BMI）平均24.9±3.88（17.1-34.3）kg/m2;Charlson全身合并症评分（Age-weighted）平均0.5±0.84（0-3）;肿瘤侧别（左/右）20/17,均为单侧单发肿瘤;最大径平均4.2±1.19（2.1-7.2）cm,肾肿瘤PADUA评分平均10.8±0.87（10-13）,术前肾小球滤过率估计值（estimated glomerular filtration rate,eGFR）平均101.2±25.58（46.6-198.7）mL/（min·1.73m2）。腔镜下分离肾动静脉、肾周及肿瘤后,阻断肾蒂或不阻断肾蒂,切除肿瘤,缝合重建。结果 37例患者手术均顺利完成,无中转手术,无任何术中并发症,无术中输血,手术时间平均241±50.0（120-330）min,术中出血量平均185±169.9（50-1 000）mL。肾脏缺血时间平均26.7±9.90（0-50）min。术后住院时间平均11.3±3.38（7-23）d。术后并发症发生率13.5%（5/37）。病理学检查提示：手术切缘均为阴性,透明细胞癌28例,嫌色细胞癌3例,乳头状细胞癌1例,血管平滑肌脂肪瘤等肾脏良性病变5例。术后随访时间平均5.9±4.64（1-12）个月,37例患者均存活,未发现局部复发或远处转移,eGFR平均下降8%,与术前相比差异有统计学意义（P=0.004）。结论对于高PADUA评分的复杂肾肿瘤,达芬奇机器人辅助腹腔镜肾部分切除术微创效果好、操作精细、安全性高,肾功能损害小,但肿瘤控制效果需进一步随访观察。
- 叶华茂王蓉吴震杰李明敏蔡晨吕晨王林辉孙颖浩
- 关键词：保留肾单位手术评分系统腹腔镜检查
- RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786-O增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响。方法构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组。应用RT-PCR技术检测786-O细胞p38mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达。CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-O细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3~5d时的增殖率均降低（P〈0.05,P〈0.01）,细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[（3.2±0.3）、（1.4±0.1）μmol/mL vs（5.4±0.2）μmol/mL,P〈0.05]。siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞。转染24h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组（76.27±5.08）相比,两组细胞的侵袭能力均下降（P〈0.01）。结论通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础。
- 陈俊明吴登爽王志向吴震杰刘冰鲍一叶华茂杨庆曲乐王林辉
- 关键词：P38增敏SIRNA干扰
- 透明细胞乳头状肾细胞癌5例病理特征报告并文献复习被引量：2
- 2016年
- 目的：探讨透明细胞乳头状肾细胞癌的临床及病理特征、诊断、鉴别诊断,提高对该肾细胞癌亚型的了解。方法：收集2013年8月-2016年6月我院收治的5例透明细胞乳头状肾细胞癌患者的临床资料,重新对HE染色组织切片以及免疫组织化学切片进行光镜观察,并随访。结果：5例患者中男4例,女1例。平均年龄（61.6±15.3）（42.0-82.0）岁。平均肿瘤最大径为（3.3±1.0）（2.5-5.0）cm,除1例为pT1b期外均为pT1a期。5例患者免疫组织化学均表现为角蛋白7（CK7）、波形蛋白（Vimentin）阳性,CD10（4/5）、TFE-3（4/4）阴性。随访时间（11.4±14.9）（2.0-37.0）个月,未发现肿瘤淋巴结及远处转移,病情稳定。结论：透明细胞乳头状肾细胞癌是一种低度恶性肿瘤,目前尚未有淋巴结或远处转移的相关报道,形态上需与多种具有透明细胞和乳头状结构的肾癌鉴别,诊断这一肿瘤至少需要同时满足形态学和免疫组织化学的诊断条件。
- 刘佳毅李尧刘佳萱高轶吴震杰谭海颂时佳子鲍一刘冰王林辉
- 关键词：肾细胞癌
- 肾癌全程管理数据库的建立和应用被引量：2
- 2017年
- 目的:通过建立肾癌全程管理数据库,提高肾癌患者全程规范化诊治水平,探讨其临床应用价值。方法:依据国内外泌尿外科学分会制定的肾癌诊疗指南,结合临床随访及用药监控的需要,以泌尿外科入院肾癌患者的病案记录、检验、检查资料和随访资料为数据库来源,建立肾癌全程管理数据库。结果:数据库界面直观,运行快速,具有精简高效的特点。利用该数据库可以将患者的基本信息、诊疗方法、术后随访、用药监控和标本管理等综合管理,较大地提高了肾癌患者全程管理的效率,并能进行统计分析和帮助制定患者个体化诊疗方案。结论:通过信息化技术建设的专科疾病全程管理,实现肾癌真正意义上的全程管理,更好地服务于临床、科研和教学工作。
- 王安邦时佳子鲍一王卫平吴震杰刘冰王林辉
- 关键词：肾癌数据库信息化管理全程管理
