安徽省自然科学基金(03043707)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 相关作者：葛建军周正春吴胜东陈兵张胜权更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学武警安徽省总队医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 犬心肌梗死模型的制备及评价被引量：5
- 2007年
- 目的建立犬心肌梗死动物模型并加以评价。方法选取杂种犬14只,建立模型前进行心电图、超声及SPECT检查;常规麻醉实验犬,开胸结扎左冠状动脉前降支,同时作心电监护;11 d后行超声心动图及SPECT检查。结果犬冠状动脉前降支结扎后,心电监护示心率加快和室性早搏,ST段压低;11 d后超声心动图显示有室壁活动减弱,心梗区心肌变薄,射血分数(EF)、每搏量(SV)、左室短轴缩短率(FS)下降,较结扎前差异有统计学意义(P<0.05);99rnTc-MIBI示:心尖部、左室前壁、室间隔明显充盈缺损。结论该方法效果确实可靠、手术方便安全,是构建心肌梗死模型的理想方法。
- 吴胜东葛建军周正春徐盛松曹浩
- 关键词：动物模型心肌梗死
- 原代培养小鼠心肌细胞的观察与鉴定被引量：6
- 2005年
- 葛建军周正春汪学龙
- 关键词：小鼠心肌细胞细胞培养免疫化学
- 自体骨髓间充质干细胞移植对犬缺血心肌的修复作用观察
- 2007年
- 目的观察自体骨骼间充质干细胞移植对犬缺血心肌的修复作用。方法通过结扎犬冠状动脉左前降支近端建立心肌梗死(MI)模型。自每只犬的髂后上棘抽取骨髓进行分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞(MSCs)。2周后用二脒苯基吲哚(DAPI)标记自体MSCs后二次开胸注射到MI瘢痕区及其周围。对照组注射等量无血清培养基。细胞移植前3 d及移植后4周分别行超声心动图和心肌灌注显影检查。结果细胞移植后4周,两组犬全部存活,超声心动图显示实验组左室射血分数(EF)、每搏量(SV)、左室短轴缩短率(FS)、左室舒张末期内径(LVD)、左室收缩末内径(LVS)分别为56.72%±4.90%、(33.24±8.50)ml、26.16%±3.33%、(3.85±0.36)cm、(2.83±0.30)cm,与移植前的50.40%±6.31%、(25.49±7.67)ml、21.86%±3.04%、(4.24±0.41)cm、(3.14±0.30)cm相比,P均<0.05;而对照组4周后左室上述指标较移植前差异不显著(P均>0.05)。99rnTc-MIBI检查显示细胞移植组原心尖部、前壁缺损区再填充明显,而对照组原心尖部、前壁缺损区再填充不明显。结论自体MSCs移植能有效地修复损伤的心肌并提高心功能。
- 张虎葛建军
- 关键词：间充质干细胞自体移植心肌梗死
- hVEGF165/pcDNA 3.1在小鼠心肌细胞中的表达
- 2006年
- 目的观察重组质粒人血管内皮生长因子165基因与质粒载体pcDNA 3.1的重组体(hVEGF 165/pcDNA 3.1)在心肌细胞中的表达,为冠心病的基因治疗和细胞移植治疗研究奠定基础。方法体外培养小鼠心肌细胞,脂质体介导hVEGF 165/pcDNA 3.1转染心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫化学方法和免疫印迹法(W estern b lotting)检测其在心肌细胞中的瞬时表达。结果RT-PCR扩增得到与hVEGF 165大小一致的目的条带,细胞免疫化学法检测到心肌细胞胞质中hVEGF蛋白,W estern b lotting在培养的细胞上清液中检测到hVEGF蛋白。结论构建的重组质粒hVEGF 165/pcDNA 3.1能在体外培养的小鼠心肌细胞中表达,可用于冠心病的基因和细胞移植治疗研究。
- 周正春葛建军陈兵张胜权汪学龙
- 关键词：血管内皮生长因子逆转录-聚合酶链反应基因转染基因表达
- 犬骨髓间充质干细胞的分离纯化与体外培养方法的探讨被引量：2
- 2006年
- 目的探讨可靠、纯度高的犬骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分离、培养、鉴定方法。方法利用密度梯度离心,结合贴壁培养法获得BMMSCs;应用流式细胞仪对BMMSCs表面标志蛋白进行细胞鉴定。结果采用Percoll分离液进行密度梯度离心可获得纯度较高的BMMSCs,接种细胞生长良好;G1期、S期、G2期细胞所占比例分别为82·4%、10·6%、7·0%;分离培养的细胞:强表达CD44、CD14阴性、CD34阴性、CDlla阴性、HLA-DR阳性率为1·1%。结论采用Percoll分离液能够较好地进行犬BMMSCs的体外分离、培养与扩增。
- 曹浩葛建军吴胜东徐盛松
- 关键词：间充质干细胞细胞培养技术骨髓细胞
- pcDNA3.1/hVEGF165的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的 克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段,构建pcDNA3·1 /hVEGF165,观察其在COS 7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病奠定基础。方法 从胎儿心肌组织中提取总RNA,应用RT PCR方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,PCR法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3 1 /myc his B中,构建pcDNA3 1 /hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS 7细胞,WesternBlotting方法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果 RT PCR方法从胎儿心肌组织获得正确的hVEGF165基因序列,成功构建pcDNA3·1 /hVEGF165且实现转染COS 7细胞的瞬时表达。结论 该实验构建的pcDNA3· 1 /hVEGF165转染真核细胞COS 7能够表达rhVEGF蛋白。
- 周正春陈兵张胜权罗欣徐从贞汪思应葛建军
- 关键词：血管内皮生长因子类基因表达
- 犬骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定被引量：6
- 2009年
- 【目的】探讨分离、培养、纯化和鉴定犬骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,观察MSCs体外生长特征。【方法】自犬髂后上棘抽取骨髓约10ml,1.073g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过及时、反复传代对MSCs进行纯化和扩增培养,测定生长曲线,并进行形态学观察。流式细胞仪检测扩增后MSCs细胞周期及表面抗原特性。【结果】MSCs在含10%小牛血清的IMEM中生长性状相对稳定,1、3、5代细胞生长曲线基本一致,增殖速度快。流式细胞仪检测表明MSCs强表达干细胞标记CD44,而不表达造血干细胞特异抗原CD34、CD11a、CD14和HLA-DR。第2代(P2)末MSCs周期显示有82.4%的细胞处于G0/G1期。【结论】密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离、纯化和培养犬骨髓MSCs。
- 吴胜东葛建军鲍峰宫为一吴宗阳
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。
- 葛建军周正春陈兵张胜权罗欣徐从贞汪思应
- 关键词：COS-7细胞真核表达载体PCDNA3.1基因克隆VEGF165基因COS7细胞
