浙江省自然科学基金(Z3090039)
- 作品数：2 被引量：21H指数：2
- 相关作者：吴建祥尚海丽周雪平陈青更多>>
- 相关机构：浙江大学厦门出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经细胞筛选与克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗CGMMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞,并分别制备其单抗腹水。4株单克隆腹水抗体间接ELISA效价在10-6～10-7之间,4株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,kappa链。特异性检测表明4株单抗仅与CGMMV的17.5 ku的外壳蛋白有特异性反应。利用最灵敏的11E5单抗为核心建立了检测CGMMV抗原包被间接ELISA方法(ACP-ELISA),该方法对病叶的检测灵敏度达到1∶10 240(g/mL)倍稀释,对提纯病毒的检测灵敏度达到0.01 ng。
- 尚海丽周雪平陈青吴建祥
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体
- 免疫斑点法和免疫捕获RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒被引量：19
- 2010年
- 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白有特异性反应,而与烟草花叶病毒、齿兰环斑病毒和健康植物没有任何反应.用ACP-ELISA分析多抗灵敏度表明多抗检测1∶40 960倍稀释的CGMMV病叶时仍呈阳性反应.用该多抗建立了检测CGMMV的免疫斑点法(dot-ELISA)和免疫捕获RT-PCR方法(IC-RT-PCR).病叶汁液可被dot-ELISA检出的最大稀释度为1∶10 240.IC-RT-PCR从感染CGMMV的病叶组织中扩增到与预期大小相同的480 bp DNA条带,且当CGMMV病叶稀释1∶163 840倍时检测仍呈阳性.检测CGMMV的dot-ELISA和IC-RT-PCR方法的建立为该病毒病的诊断和控制提供了技术支撑.
- 尚海丽周雪平吴建祥
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒多克隆抗体DOT-ELISAIC-RT-PCR
