国家自然科学基金(81272758)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：胡洁王雅娟韩慧霞赵海燕陆艳霞更多>>
- 相关机构：南方医科大学广东药学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- EMT与非EMT细胞在大肠癌侵袭转移中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的探讨TGF-β1诱导大肠癌HT29细胞发生上皮细胞间质转化(EMT)后对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。方法 TGF-β1长期诱导HT29细胞,RT-PCR检测细胞E-钙黏素和波形蛋白mRNA的表达;HE和考马斯亮蓝染色后分别观察细胞形态和骨架;对HT29、经TGF-β1诱导发生EMT的HT29/TGF-β1和两者混合培养的细胞分别进行划痕实验;绿色荧光蛋白标记质粒转染HT29/TGF-β1细胞,红色的转染HT29细胞,两者混合培养进行划痕实验。结果 TGF-β1连续刺激10 d后HT29的Ecadherin表达显著下降,Vimentin表达显著上调(P<0.05);连续刺激40 d后,细胞变梭,细胞间连接不紧密。细胞蓝色丝网状结构的骨架蛋白明显增多,相邻细胞间骨架连接不如刺激前紧密;细胞划痕实验显示刺激后的HT29细胞迁移速度最快,HT29细胞最慢;转染后见红色和绿色的细胞在迁移生长的过程中分布均匀。结论 TGF-β1可诱导大肠癌细胞发生EMT;大肠癌中发生EMT的细胞可以加速非EMT细胞的侵袭转移速度。
- 王雅娟胡洁赵海燕韩慧霞
- 关键词：大肠癌TGF-Β1EMT
- 人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响
- 2014年
- 目的构建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒载体,并探讨miR-339-5p/3p对结肠癌细胞SW620迁移能力的影响。方法由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-339前体序列(pre-miR-339)及其侧翼序列,将pre-miR-339和PLVTHM载体经双酶切后连接,产生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,并经测序鉴定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三质粒包装系统共同转染293FT细胞,包装产生慢病毒。流式细胞仪筛选建立稳定过表达premiR-339的SW620细胞株,实时荧光定量RT-PCR检测miR-339-5p及miR-339-3p表达。利用细胞划痕实验进行细胞迁移能力检测。结果成功构建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,测序证实所插入基因序列完全正确。倒置荧光显微镜下观察可见转染后的293FT细胞及SW620细胞均表达绿色荧光。在过表达pre-miR-339的SW620亚细胞系中,miR-339-5p及miR-339-3p表达水平显著高于空载对照组。划痕实验结果显示:与SW620/PLVTHM-NC组相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339组细胞迁移减缓,划痕较宽。结论成功构建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体和稳定过表达miR-339-5p及miR-339-3p的SW620亚细胞系,并证实miR-339-5p/3p可抑制结肠癌细胞SW620的迁移能力。
- 周畅陈芳陆艳霞袁理李学农
- 关键词：结肠癌慢病毒载体细胞迁移
