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我国近期7株猪瘟流行野毒E2基因变异研究被引量：2: 2005年; 应用RT-PCR和nPCR扩增了7株国内近期(2001年-2003年)流行的猪瘟野毒E2基因,分别克隆至pGEM-T载体并对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导,同时将其与C株、Alfort株、Brecsia株进行了同源性比较及遗传进化分析,构建了CSFV的遗传发生树,并对E2结构与功能进行了分析.所测7株野毒均包括完整的信号肽序列及部分跨膜区在内的1 170 bp,与C株、Alfort株、Brescia株核苷酸序列同源性分别为91.6%～94.5%、89.2%～92.7%、85.9%～89.3%,氨基酸同源性分别为91.2%～95.8%、88.9%～92.0%、84.0%～90.1%;而7株野毒之间的差异很小,其核苷酸序列同源性为95.8%～99.7%,氨基酸同源性为96.3%～99.1%.所绘制的遗传发生树分为2个组群,所测得7株流行野毒均属于第1群,而且可分为两亚群,与C株在同一亚群.同时对主要抗原区氨基酸位点变异进行了分析,对其抗原决定簇的变异情况进行了推测.; 胡慧邱昌庆周继章张彦明; 关键词：猪瘟病毒 E2基因同源性遗传发生树

口蹄疫病毒的纯化及鉴定被引量：7: 2004年; 通过PEG 6 0 0 0沉淀 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法提取纯化了口蹄疫完整病毒粒子 (FMDV ) ,经 30g/L磷钨酸负染后电镜观察 ,FMDV 14 6S为中心黑染的圆形颗粒 ,与中心透亮的FMDV空衣壳有明显区别 ,SDS PAGE和Western blotting试验结果表明 ,FMDV 14 6S电泳出现VP1、VP2、VP3三条结构蛋白带 ,其中VP1和VP3与阳性血清发生反应出现 2条明显的条带。; 王春奕马军武伏小平; 关键词：口蹄疫病毒提纯 SDS-PAGE 电镜

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因的克隆、表达与蛋白结构预测被引量：3: 2007年; 应用PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡E.tenella杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-1E基因。序列分析表明,E.tenella YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,编码170个氨基酸,与报道的E.tenella甘肃株(GS)3-1E基因相似性为99.8%,两者推导的氨基酸序列相似性为99.4%;而与文献报道的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)美国株(US)3-1E基因序列的相似性为98.8%,推导的氨基酸序列相似性为98.8%。利用生物信息学和分子生物学软件对3-1E基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为结构松散的球状蛋白。将3-1E基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-3-1E重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表明成功地表达出了分子量为44.7 ku的融合蛋白。该研究为球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。; 翟军军于三科才学鹏林青窦永喜景志忠闫鸿斌田广孚; 关键词：3-1E基因柔嫩艾美耳球虫克隆蛋白结构预测

猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达被引量：3: 2004年; 用RT PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株 (Shimen)、近期地方流行的属于第 1群毒株的新疆毒株 (XJ)和第 2群代表毒株甘肃临洮 (LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增 ,均得到约 5 6 1bp的基因片段 ;经克隆测序及序列分析 ,该基因编码 187个氨基酸残基 ,预计蛋白分子质量为 2 1.7ku。将这 4个基因分别克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中 ,阅读框是正确的 ,从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL2 1(DE3)中 ,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG )进行诱导表达 ,对表达的蛋白用SDS PAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明 ,E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达 ,表达的蛋白多以包涵体形式存在 ,表达产物的分子质量约为 5 0 .0ku ,与理论推测的分子质量一致 ;薄层凝胶扫描分析表明 ,表达蛋白约占菌体蛋白总量的 2 0 .1% ;免疫印迹结果证明 ,表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。; 胡慧邱昌庆张彦明; 关键词：猪瘟病毒 E2基因原核表达克隆测序菌体蛋白

猪瘟病毒E2重组蛋白纯化和复性条件的研究被引量：2: 2005年; 对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了免疫活性检测,结果表明,其比未纯化蛋白的免疫活性高20倍左右。; 胡慧邱昌庆张彦明; 关键词：猪瘟病毒包涵体复性纯化

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建被引量：2: 2007年; 在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo（dT）引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×10^6pfu/mL,插入片段约100-3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。; 林青才学鹏窦永喜翟军军闫鸿斌张彦明田广孚景志忠; 关键词：柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊子孢子 CDNA表达文库

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国家社会公益研究专项计划(2001DIA10006)