国家科技重大专项(2012ZX10001-005)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：冯霞曾毅余双庆徐柯陈丹瑛更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心北京工业大学北京市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列分析及表型预测
- 2014年
- 目的 克隆并分析HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列,根据其氨基酸序列进行表型预测,为疫苗的抗原设计奠定基础.方法 采集北京地区HIV-1 B/C重组型的抗凝全血标本,分离血浆和提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增rev-env基因,对扩增产物进行序列测定.根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并对重要的Env功能结构域进行深入的分析和比较.结果 从12例B/C重组型HIV-1感染者中成功克隆到7个rev-env基因,序列分析发现其中6个有完整的开放读码框（ORF）,全部为CRF_07B/C重组型.6个Env蛋白氨基酸N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及静电荷数目预测全部使用CCR5辅助受体;GP120/GP41剪切位点高度保守,预测所有GP160前体都能有效剪切;对几个已知中和抗体的中和位点分析推测全部的6个序列都对2G12、2F5中和不敏感;对4E10、PG9及PG16中和敏感.结论 有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗和药物研究提供依据.
- 汪孟冉陈丹瑛何小周叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：HIV-1
- HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因改造及其重组DNA疫苗的构建被引量：4
- 2014年
- 目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因（wt.AE env）相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的.
- 陈丹瑛汪孟冉何小周叶景荣余双庆李秦剑徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗密码子
- 北京市HIV-1 B’／C重组型分子流行特征分析被引量：2
- 2013年
- 目的分析北京市HIV-1B’／C重组型毒株的分子流行特征。方法采集北京市2006-2010年新发现B’／C重组型HIV-1感染者的抗凝全血标本，分离血浆和提取病毒RNA，用反转录／巢式聚合酶链式反应扩增病毒gag基因，并进行系统进化分析。结果成功扩增了159例标本，CRF07-BC147例，CRF08-BC12例，CRF07-BC系统进化树中存在3个主要的亚簇，IDU-Max亚簇包含89例样本，静脉吸毒传播占71．9％，同参考株97CN001组间离散率为2．8％；IDU-Min亚簇包含22例样本，静脉吸毒传播占77．3％，组间离散率为2．8％；MSM亚簇包含34例样本，男男同性传播占67．6％，组间离散率为3．1％；3个亚簇内均无其他国家的序列，只有IDU—Max亚簇包含1条来自中国台湾的序列；核苷酸多态性分析结果显示，以IDU．Max亚簇为参照，IDU．Min和MSM亚簇分别有32和41个位点的核苷酸组成存在著性差异。结论首次观察到北京市流行的CRF07-BC病毒株中存在3个独立的亚簇，异性传播和静脉吸毒传播序列混杂分布，而男同传播病例则聚集成1个亚簇，应当继续对B’／C重组型分子流行特征进行监测。
- 叶景荣董晓根卢红艳郝明强苏雪丽辛若雷余双庆冯霞闫红贺雄曾毅
- 关键词：HIV分子流行病学
- 表达HIV-1CRF01_AE gp145的rMV MVA疫苗构建及免疫原性评价被引量：1
- 2015年
- 目的 构建携带密码子优化型HIV-1 CRF01_AE gp145基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株（MVA）载体疫苗,并对其免疫效果进行初步评价.方法 利用前期研究获得并改造的HIV-1CRF01_AE env共享基因,去除其胞内区序列得到gp145基因,将此基因克隆至重组MVA载体系统的穿梭质粒pSC11上,以穿梭质粒转染提前感染了野生型MVA病毒的BHK-21细胞,通过同源重组获得携带gp145基因的重组MVA疫苗,即rMVA-AEgp145.经鉴定证实重组MVA疫苗可表达Gp145蛋白后,在BALB/c小鼠中进行rMVA-AEgp145疫苗单独免疫的效果评价.结果 重组MVA疫苗可有效表达Gp145蛋白,单独免疫BALB/c小鼠能诱导较高水平的细胞免疫反应.结论 成功构建了表达HIV-1 CRF 01_AEgp145基因的重组MVA疫苗,在小鼠体内单独免疫可以诱导较强的env特异性CTL应答。
- 湛倩倩陈丹瑛叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗
- 负载Ad5-HIVgag/env的DC疫苗在小鼠体内的免疫原性研究
- 2016年
- 目的 用Ad5-HIV gag/env负载小鼠树突状细胞（Dendritic cell,DC）,探索其在小鼠体内诱导的HIV Gag/Env特异性细胞免疫应答.方法 贴壁法分离纯化BALB/c小鼠DCs,并用细胞因子诱导DC细胞成熟,采用流式细胞术鉴定其纯度.利用重组腺病毒Ad5-HIV gag/env感染DC细胞,制备DC疫苗.用所制备DC疫苗免疫小鼠,在免疫后的不同时间点,用ELISPOT方法检测小鼠体内HIV特异性细胞免疫应答水平.结果 成功培养出Ad5-HIVgag/env负载的DC疫苗;免疫荧光以及流式细胞术检测到Gag/Env抗原可在DC内有效表达;上述DC疫苗免疫小鼠后能诱导高水平HIV特异性细胞免疫反应.结论 Ad5-HIV gag/env负载的树突状细胞疫苗可以在小鼠体内诱导较强的HIV特异性细胞免疫反应.
- 刘超何小周刘雪徐柯曾毅冯霞
- 关键词：树突状细胞疫苗HIV-1HIV-1
- 含密码子优化的SIV gag基因的DNA疫苗与rAd5疫苗构建及免疫原性评价被引量：3
- 2014年
- 目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方法比较优化前后gag基因表达水平.将优化后的gag基因插入重组腺病毒载体,构建rAd5-SIVgag疫苗.在BALB/c小鼠中分别比较DNA疫苗及rAd5-SIV.gag疫苗单独及联合免疫的效果.结果 密码子优化的SIVgag基因的表达水平远高于野生型SIVgag基因.重组腺病毒疫苗免疫一次或两次诱导的细胞免疫反水平分别高于DNA疫苗免疫一次或两次.两种疫苗联合免疫的反应水平与腺病毒疫苗免疫两次的水平相当,高于DNA疫苗单独免疫及腺病毒疫苗单独免疫一次的结果.结论 成功优化了SIV gag基因,使其不依赖Rev高水平表达；成功构建了表达优化后SIV gag基因的DNA疫苗和rAd5疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答.
- 陈丹瑛何小周汪孟冉余双庆徐柯李秦剑曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗腺病毒科
- 从人类免疫缺陷病毒1型感染者中筛选中和抗体的研究
- 2016年
- 目的利用B细胞培养和RT-PCR技术从我国人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中筛选出具有广谱中和活性的人单克隆抗体。方法本研究采集HIV-1感染者抗凝全血,分离出外周血单个核细胞,用磁珠分选纯化记忆性B细胞,在体外选择3T3-hCD40L作为饲养细胞,并使用细胞因子白细胞介素(IL)-2和IL-21诱导记忆性B细胞分泌IgG,用HIV假病毒微量中和的方法进行筛选。从有中和活性的孔中分别扩增出B细胞IgG的轻链和重链基因,并将其克隆到含IgG恒定区基因的载体上。然后将携带重链和轻链基因的质粒进行大量表达,得到人单克隆抗体,并进行抗体结合活性、中和活性及与抗原Gp120亲和力的鉴定。结果从我国3例HIV-1感染者记忆性B细胞中筛选出3株对HIV-1Env抗原有结合活性的单克隆抗体。其中8E7和55B3主要与Gp120结合,19GF3与Gp120和FLSC均可结合且结合活性无明显差异;基因变异大的8E7抗体对A、B、C三种亚型的假病毒均有一定的中和活性,55B3对SF162有中和活性,19GF3未检测到中和活性;这三种单抗的亲和力都很强,8E7、19GF3、55B3与抗原Gp120的KD值分别为6.45×10^(-10) mol/L、1.12×10^(-10) mol/L、2.76×10^(-10) mol/L。结论成功建立了在96孔板中高效刺激人B细胞在体外分泌IgG的方法,并利用HIV假病毒微量中和实验和RT-PCR技术筛选得到对HIV-1具有中和活性的人单克隆抗体。
- 刘雪王琬玓冯霞徐柯余双庆曾毅
- 关键词：结合活性中和活性
