四川省科技支撑计划(2009SZ0117)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 相关作者：李洪刘友平段春燕代荣阳陈川宁更多>>
- 相关机构：泸州医学院泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划四川省教育厅重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC-T6激活、增殖及转分化的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:观察乙醛对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法:HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维粘连素(FN)的表达;Western blotting检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果:VG染色乙醛刺激明显促进HSC贴壁及重叠、明显促进HSC增殖和显著增加胶原纤维蛋白的表达;MTT检测结果发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激组较对照组TIMPⅠ和FN的表达明显上调(P<0.05);Western blotting检测结果显示,乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05)。结论:乙醛刺激可明显激活HSC-T6细胞株,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。
- 陈川宁陶忠桦李洪
- 关键词：肝星状细胞乙醛转分化
- Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株的增殖及转分化的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法 HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理,加入Notch途径特异性阻断剂DAPT和TGF-β/ALK5途径特异性阻断剂SB-431542,分为空白组、单阻断组及双阻断组;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维黏连素(FN)的表达;RT-PCR检测Notch途径节点分子RBP-JK、Hes1及效应蛋白Smad3表达量;Western印迹检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果 MTT检测发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激后TIMP I和FN的表达明显上调(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);RT-PCR检测Hes1乙醛刺激后上调明显(P<0.05),阻断组RBP-JK、Hes1及Smad3明显下调(P<0.05),双阻断组Hes1及Smad3下调更明显(P<0.05);Western印迹检测结果显示乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05),双阻断组下调更明显(P<0.05)。结论 Notch通路明显影响乙醛对肝星状细胞的增殖及转分化为肌成纤维细胞。
- 肖斌陈川宁陶忠桦李洪
- 关键词：肝星状细胞DAPT
- 未折叠蛋白反应通过自噬抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡被引量：4
- 2011年
- 目的:研究未折叠蛋白反应对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:在采用二硫苏糖醇和衣霉素诱导未折叠蛋白反应的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析未折叠蛋白反应对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响及其机制。结果:二硫苏糖醇和衣霉素预处理促进顺铂诱导的自噬反应并抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡,抑制自噬反应明显削弱二硫苏糖醇和衣霉素预处理对顺铂作用下肝癌细胞的保护作用。结论:未折叠蛋白反应能够通过促进自噬抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。
- 代荣阳段春燕刘友平严冬梅李洪
- 关键词：未折叠蛋白反应自噬顺铂凋亡肝癌细胞
- 真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡被引量：1
- 2013年
- 目的探讨真核起始因子2α（eW2α）的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法将肝癌细胞随机分为对照组和实验组，在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2cL磷酸化的基础上，用流式细胞和Westerm blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物。多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验。结果顺铂诱导肝癌细胞eIF2α发生51位丝氨酸磷酸化。在突变载体转染条件下，顺铂（10ug／ml）诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24h凋亡的平均百分率分别为21．7％±1．5％和50．7％±2．1％（t=19．454，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21．0％±1．0％和57．3％±2．1％（t=27．250，P〈0．05）。在抑制剂作用条件下，顺铂（15μg／ml）诱导对照组和实验组SMMC～7721细胞在36h凋亡的百分率分别为50．3％±2．5％和16．3％±2．1％（t=18．031，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36h凋亡的百分率分别为42．0%±2．6%和12．0%±2．％（t=15．667，P〈0．05）。同时，Westem blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切。结论eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用。
- 冯春红陈润陈绍坤李娟段春燕刘友平李洪代荣阳
- 关键词：细胞凋亡顺铂
- 乙醛刺激大鼠肝星状细胞活化的动力学分析被引量：1
- 2012年
- 目的:从动力学角度分析乙醛刺激大鼠肝星状细胞活化的时间变化,以确定大鼠肝星状细胞活化的最佳时间,从而为后续肝纤维化的相关研究提供实验数据。方法:培养大鼠肝星状细胞,同步化处理12h,随机分为乙醛刺激组和对照组。其中乙醛刺激组细胞加入乙醛(终浓度200μmol/L)分别刺激12h、24h和36h,每12h补加一次乙醛;对照组加入等量培养基。采用MTT法测定各组细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维黏连素;Western blotting检测α-SMA的表达。结果:加入乙醛后,细胞的增殖活性随时间的延长而增强,24h细胞增殖活性达最高峰;ELISA测定结果显示,乙醛刺激组较对照组有明显上调;Western blotting检测结果,乙醛刺激组明显促进α-SMA表达量上调,且在24h达高峰。结论:乙醛可激活大鼠肝星状细胞且活化的最佳作用时间为24h。
- 段春燕陈川宁严冬梅刘友平代荣阳李洪
- 关键词：肝星状细胞
- 流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备
- 2011年
- 目的:纯化原核表达的JEV E蛋白并制备其多克隆抗体。方法:IPTG诱导大肠杆菌表达JEV E蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化。将纯化后的JEV E蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗血清。琼脂糖双向扩散实验及间接ELISA检测抗体效价。结果:获得浓度1.85mg/ml、纯度92%的JEV E蛋白,并制备了JEV E蛋白兔多克隆抗体血清。琼脂糖双向扩散实验显示多克隆抗体血清1∶16稀释时仍能观察到沉淀线,间接ELISA法显示1∶200稀释时具有较高效价。结论:纯化了JEV E蛋白,并制备出了多克隆抗体。
- 罗波毛樱逾龚舒王丽李洪
- 关键词：JEVE蛋白多克隆抗体
- 真核起始因子2α的磷酸化促进多柔比星介导的肝癌细胞凋亡被引量：3
- 2012年
- 目的:研究真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2 alpha,eIF2α)的磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法:在采用eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal(抑制S51去磷酸化)和eIF2α突变载体eIF2αS51A(不能发生S51磷酸化)改变eIF2α磷酸化的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析eIF2α磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞LM3凋亡的影响。结果 :eIF2α突变载体eIF2αS51A抑制多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡,而eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal则促进多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡。结论:eIF2α的磷酸化在多柔比星介导的肝癌细胞凋亡中起重要作用。
- 代荣阳张艺陈绍坤段春燕刘友平李洪
- 关键词：多柔比星凋亡肝癌细胞
- miR-221／222在肝癌细胞抵抗内质网应激凋亡中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的研究内质网应激对miR221／222的调控及其在肝癌细胞抵抗内质间应激诱导细胞凋亡中作用。方法采用miR221／222抑制物和miR221／222类似物分别阻断或模拟内源性miR-221／222的功能，并利用Western blot和流式细胞技术分析内质网应激条件下miR-221／222对肝癌细胞周期和凋亡的调控作用。结果内质网应激诱导miR221／222表达下凋，miR221／222类似物和抑制物分别抑制和促进内质网应激诱导的p27Kip1表达上调，干扰p27^kipl不仅抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0／G1期阻滞，也促进了内质网应激介导的肝癌细胞凋亡。结论内质网应激诱导miR-221／222下调能够通过促进p27^Kipl表达对内质网应激条件下肝癌细胞周期和凋亡起重要调控作用。
- 刘友平段春燕陈川宁严冬梅陈绍坤李娟李洪代荣阳
- 关键词：肝细胞内质网应激细胞周期MIR
