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国家自然科学基金(30771607)

作品数:4 被引量:14H指数:2
相关作者:张彦明代晨唐青海侯勃朱晓娟更多>>
相关机构:西北农林科技大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇猪瘟
  • 3篇猪瘟病
  • 3篇猪瘟病毒
  • 3篇瘟病毒
  • 3篇细胞
  • 3篇病毒
  • 2篇血管
  • 2篇血管内皮
  • 2篇血管内皮细胞
  • 2篇脐静脉
  • 2篇脐静脉血
  • 2篇脐静脉血管
  • 2篇脐静脉血管内...
  • 2篇细胞株
  • 2篇内皮
  • 2篇内皮细胞
  • 2篇MICROR...
  • 1篇猪血
  • 1篇猪血管内皮细...
  • 1篇转染

机构

  • 3篇西北农林科技...

作者

  • 3篇张彦明
  • 2篇代晨
  • 1篇程媛媛
  • 1篇张倩
  • 1篇康恺
  • 1篇朱晓娟
  • 1篇谭晓妮
  • 1篇侯勃
  • 1篇唐青海
  • 1篇张旭
  • 1篇邓文

传媒

  • 1篇动物医学进展
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇Agricu...

年份

  • 1篇2011
  • 2篇2010
  • 1篇2009
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用被引量:1
2010年
【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。
张旭张彦明张倩程媛媛谭晓妮
关键词:猪瘟病毒MIRNA
猪血管内皮细胞中与猪瘟病毒相关microRNA的初步筛选被引量:4
2010年
本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV3′和5′非翻译区(Untranslated region,UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-mi R-let7c、ssc-mi R-106a、ssc-mi R-18、ssc-mi R-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′-UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV3′-UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-mi R-18的抑制作用比较明显。
侯勃张彦明朱晓娟康恺代晨唐青海
关键词:猪瘟病毒MICRORNA
表达miR-150shRNA细胞株的初步建立被引量:1
2009年
为了探讨融合microRNA重组干扰载体构建的方法,为今后mi R-150对猪瘟病毒(CSFV)潜在的调控进行研究,利用生物信息学技术筛选出mi R-150,设计并合成了表达mi R-150的两条shRNA序列的DNA单链,将其退火后与干扰载体pGenesil-1连接,构建了含有mi R-150shRNA和绿色荧光蛋白基因的重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,提取并纯化质粒后,采用脂质体法将重组质粒转染PK-15细胞,用G418抗性筛选。经过酶切鉴定和测序鉴定,表明成功构建了重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,并在转染24 h后即可检测到绿色荧光。本研究成功得到稳定表达mi R-150的细胞株,所建的方法可以应用于各种microRNA的构建。
代晨邓文张彦明
关键词:猪瘟病毒发夹RNA转染
A MicroRNA Catalog of Swine Umbilical Vein Endothelial Cells Identified by Deep Sequencing被引量:8
2011年
MicroRNAs (miRNAs) are endogenous -22 nt RNAs that play important regulatory roles in targeting mRNAs for cleavage or translational repression. Despite the discovery of increasing numbers of human and mouse miRNAs, little is known about miRNAs from pig. In this study, we sought to extend the repertoire of porcine small regulatory RNAs using Solexa sequencing. We sequenced a library of small RNAs prepared from immortalized swine umbilical vein endothelial cells (SUVECs). We produced over 13.6 million short sequence reads, of which 8 547 658 perfectly mapped to the pig genome. A bioinformatics pipeline was used to identify authentic mature miRNA sequences. We identified 154 porcine miRNA genes, among which 146 were conserved across species, and 8 were pig-specific miRNA genes. The 146 miRNA genes encoded 116 conserved mature miRNAs and 66 miRNA^*. The 8 pig-specific miRNA genes encoded 4 mature miRNAs. Four potential novel miRNAs were identified. The secondary structures of the 154 miRNA genes were predicted; 13 miRNAs have 2 structures, and miR-9 and miR-199 have 4 and 3 structures, respectively. 36 miRNAs were organized into 19 compact clusters, miR-206, miR-21 and miR-378 were the relatively highly expressed miRNAs. In conclusion, Solexa sequencing allowed the successful discovery of known and novel porcine miRNAs with high accuracy and efficiency. Furthermore, our results supply new data to the somewhat insufficient pig miRBase, and are useful for investigating features of the blood-brain barrier, vascular diseases and inflammation.
DAI Chen ZHANG Yan-ming ZHANG Qian WU Zong-song DENG Wen ZHANG Xu GUO Kang-kang TANG Qing-hai HOU Bo
关键词:MICRORNASEQUENCINGPIG
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