福建省自然科学基金(2002F003)
- 作品数：7 被引量：43H指数：4
- 相关作者：吴宝成吴异健李国平陈枝华王全溪更多>>
- 相关机构：福建农林大学福建出入境检验检疫局福建医科大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程更多>>
- 番鸭呼肠孤病毒受体分子量的测定研究
- 培养番鸭成纤维细胞并接种番鸭呼肠孤病毒(DRV)B3病毒株进行病毒增殖,提纯病毒;细胞毒接种健康番鸭制备阳性血清;低渗破膜法提纯番鸭红细胞膜蛋白并进行变性电泳,然后采用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定得DRV红细胞...
- 孙军杰吴异健王劭吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒病毒受体
- 文献传递
- 番鸭呼肠孤病毒YB株σNS基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2011年
- 参考GenBank鸡正呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirns,DRV)σ非结构蛋白(σNS)基因序列设计合成1对引物,对番鸭呼肠孤病毒YB(DRV-YB)株σNS基因进行RT-PCR扩增,克隆到pMD18-T载体中,并对克隆产物进行PCR鉴定和测序;DRV-YB株编码σNS的基因全长为1 191bp,其5’和3’端具有典型的禽正呼肠孤病毒的特征,开放阅读框从24～1 127位碱基,编码367个氨基酸残基。DRV-YB株与法国番鸭呼肠孤病毒89026(DRV-89026)株和鸡呼肠孤病毒S1133(ARV-S1133)株σNS基因核苷酸同源性分别为87.3%和76.5%;推导氨基酸同源性分别为94.8%和90.5%。进化树分析表明DRV-YB株σNS与DRV-89026株亲缘关系较近,处在番鸭呼肠孤病毒的分支上。分析发现DRV-YB株S组基因大小和编码蛋白与法国番鸭呼肠孤病毒89026、89330株S组一致,具有法国番鸭呼肠孤病毒89026、89330株S组的特征,而与ARVS1133、176等鸡源呼肠孤病毒差异较大。表明不同禽正呼肠孤病毒株S组基因的大小和编码同一蛋白的等位基因呈现多态性,自然界中禽正呼肠孤病毒不同毒株之间存在基因交换和基因重组现象。
- 吴异健王劭黄一帆吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒克隆
- 禽(番鸭)呼肠孤病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2009年
- 为了建立检测(番鸭)呼肠孤病毒(DRV)感染的方法,本研究根据DRV的σNS基因核苷酸序列设计引物及TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法。用已知浓度的重组质粒为标准品,构建的标准曲线的相关系数达到99%。试验表明,该方法的重复性、稳定性、特异性良好,且灵敏度高,可以检测到1.0×102拷贝/μL的标准品,比普通PCR至少高100倍。该检测方法对DRV人工感染番鸭肝脏组织检出率达到100%。本实验所建立的TaqMan探针荧光RT-PCR为的快速检测以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段。
- 严进关育芳李中华吴异健吴宝成
- 关键词：呼肠孤病毒番鸭TAQMAN探针荧光RT-PCR
- 番鸭源呼肠孤病毒YJL株σNS基因克隆和序列分析
- 2010年
- 参考GenBank上公布的禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)σ非结构基因(σNS)序列设计合成一对引物,对番鸭源呼肠孤病毒YJL株σNS全基因进行RT-PCR扩增,克隆到pMD18-T载体中,并对克隆产物进行PCR鉴定和测序;YJL株σNS的编码基因位于S4节段,基因全长1192 bp,其5′端和3′端序列分别为5′-GCTTTT和3′-TATTCATC,具有典型的禽正呼肠孤病毒基因末端碱基序列;σNS基因只有一个有效阅读框(24-1127 bp),编码由367个氨基酸组成的σNS蛋白;σNS蛋白的分子质量约为40.57 ku,等电点(PI)为7.875.YJL株与法国MDRV-89026株σNS基因核苷酸的同源性为77.8%,推导氨基酸的同源性为90.2%;与ARV-S1133株σNS基因的同源性为99.4%,推导氨基酸的同源性为99.5%;系统进化树分析表明,YJL株σNS基因和蛋白与S1133株的亲缘关系更近,处在ARV分支上.可见,番鸭源呼肠孤病毒YJL株属于ARV,同时也表明我国发病番鸭群中存在不同基因群的呼肠孤病毒感染.
- 吴异健王劭黄一帆吴宝成
- 关键词：克隆
- 番鸭呼肠病毒抗体间接ELISA方法的建立被引量：8
- 2005年
- 用硫酸铵粗提的番鸭呼肠病毒作为包被抗原,成功地建立了检测番鸭呼肠病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明,包被抗原作1∶80稀释,待检血清作1∶40稀释,酶标二抗作1∶200稀释,是最佳的工作浓度,而且该法特异性高,重复性好,质量稳定,敏感性强,结果可靠,是一种适合于流行病血清学调查的快速、敏感、准确、特异、重复性好的方法。
- 王全溪吴异健陈枝华李国平吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠病毒间接ELISA抗体
- 禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验被引量：7
- 2007年
- 从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒,在电镜下观察到病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,外衣壳直径约75 nm,内核约50 nm;分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力,对乙醚不敏感;病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE;爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状,并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化;血清中和交叉试验表明,该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒(YH和YB)分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验,可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。
- 梁英吴异健李文迹李江森吴宝成
- 关键词：禽呼肠孤病毒
- 禽(番鸭)呼肠孤病毒诱导脾脏单核—巨噬细胞和淋巴细胞凋亡的超微观察被引量：23
- 2004年
- 用禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株,人工感染1日龄雏番鸭及鸭胚,扑杀典型症状的病雏鸭.采取病变的器官组织,进行透射电镜超微结构的观察和研究.结果显示:全身多种器官组织中的单核—巨噬细胞、淋巴细胞和成纤维细胞都受到番鸭呼肠孤病毒不同程度的破坏,其中以脾脏细胞受破坏最为严重,这些细胞除了急性死亡以外,均可在病毒诱导下发生细胞凋亡,表现为:细胞皱缩→染色体浓缩、边聚、外排→形成凋亡小体、自噬小体→被周围吞噬细胞包裹、吞噬、消化降解→终末溶酶体形成.
- 姚金水吴宝成陈文列陈家祥吴异键
- 关键词：单核巨噬细胞淋巴细胞凋亡脾脏番鸭呼肠孤病毒
- 番鸭呼肠孤病毒乳胶凝集试验检测方法的建立被引量：6
- 2005年
- 建立了用纯化的抗番鸭呼肠孤病毒(DRV)抗体致敏乳胶检测DRV抗原的方法。通过试验,确定抗体致敏乳胶的最佳浓度为1∶10(IgG蛋白浓度为0.424 2 mg/mL),最佳致敏温度为37℃,最佳致敏时间为120 min。用所建立的方法对人工感染的1 日龄雏番鸭30 只进行粪便检测,结果表明,感染后第3 d粪便中即可检测到病毒,直至人工感染鸭全部死亡都可从粪便中检出病毒抗原;对同样人工感染的30只1日龄雏番鸭的心、肝、脾病料用所建立的方法检测,结果表明,感染后第4 d,2/3番鸭脾病料检出阳性;感染后第5 d,2 只死亡鸭中有1 只肝病料检出阳性,脾病料2只都呈阳性;此后的病死鸭脾和肝病料均为阳性,而心则未检出阳性。
- 王全溪吴异健陈枝华李国平吴宝成
- 关键词：呼肠孤病毒凝集蛋白浓度粪便检测雏番鸭病料
- 禽呼肠孤病毒番鸭分离株的分子特性研究
- 前言： 1997年以来,福建省番鸭养殖场爆发了一种以病鸭肝脏出现肉眼可见白色坏死点,地方上称为“花肝病”的传染病。发病率达90%,死亡率在10%～30%,给养禽业造成重大损失。
- Baocheng WuYijian WuShao WangGuangpu Li李光普
- 关键词：禽呼肠孤病毒分离株分子特性
- 文献传递
