湖北省科技攻关计划(2005AA401D60)
- 作品数：6 被引量：42H指数：4
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及其免疫原性的初步研究
- 2007年
- 从H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR克隆全长血凝素(He-magglutinin,HA)基因,并进一步克隆HA的主要抗原区HA1基因。将HA1克隆到原核表达载体pGEX-KG,与谷胱苷肽(GST)融合表达,表达的融合蛋白GST-HA1以包涵体形式存在。包涵体经变性、复性处理,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的免疫学活性。ELISA检测发现,GST-HA1只能与H9亚型禽流感病毒抗体发生反应,而与H5和H7亚型禽流感病毒抗体无交叉反应。进一步将纯化的融合蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体。制备的HA1蛋白特异性强,具有良好的免疫原性,为禽流感病毒的鉴别诊断和禽流感疫苗开发奠定了基础。
- 吴仁蔚张万坡胡思顺肖运财毕丁仁
- 关键词：禽流感病毒原核表达
- 禽流感灭活疫苗对商品肉鸭免疫效果的评价被引量：2
- 2007年
- 为了了解和掌握商品肉鸭高致病性禽流感疫苗的免疫效果,对不同日龄的商品肉鸭进行了免疫试验。结果表明,3～10日龄时(H组)免疫,可以有效地刺激肉鸭产生禽流感HI抗体,并一直持续到40日龄;但由于母源抗体的干扰,在20日龄前后5～7 d,是一段易感染的免疫空白期。建议每年禽流感的免疫预防须提前到10月中上旬进行,以使侯鸟南飞迁徙时,所有家养水禽有充足的时间产生免疫力。
- 胡思顺郭锐刘梅肖运才李自力许青荣李东毕丁仁
- 关键词：禽流感商品肉鸭免疫预防
- 胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究被引量：30
- 2008年
- 对禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体4C4进行胶体金标记,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫,鸡抗AIVIgG和羊抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素(NC)膜上作为检测线和质控线,制作禽流感H9亚型免疫层析检测试纸条。验证结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可判定结果,对H9亚型禽流感病毒及其标准血凝抗原具有高度特异性,与其它亚型禽流感病毒标准抗原及其它禽类病毒没有交叉反应,检测灵敏度比HA试验高4倍以上。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对实验室送检及临床采集的共311份喉头拭子进行检测,结果与本室研制的禽流感ELISA试剂盒总符合率为92%,随机选取10份阳性样品经病毒分离证实无一误检。结果证明,本研究建立的H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于H9亚型禽流感病毒的现场检测及鉴别诊断。
- 彭伏虎王政张进良张文通张展英胡思顺肖运才毕丁仁
- 关键词：禽流感病毒H9亚型单克隆抗体
- 禽流感病毒感染与疫苗免疫鉴别诊断试纸条的研制及应用被引量：5
- 2009年
- 【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52kD,具有免疫学活性。在25min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和NS1蛋白免疫鸡血清在试纸条的检测线处出现明显的棕红色,呈明显的阳性反应,而其它病原的血清在试纸条的检测线处不出现任何颜色,呈阴性反应。而且感染鸡群的NS1抗体在感染后3d即可检测到,感染后1～2周为高峰期,维持时间约1周,检测阳性率为80%左右。临床样品的阳性率为9.1%。【结论】试纸条使用方便,操作简单,25min内可以用肉眼判断结果,可区分禽流感疫苗免疫和野毒感染家禽,具有很大的推广应用价值。
- 胡思顺郑兴华蔡开妹彭伏虎张文泽李自力肖运才刘梅毕丁仁
- 关键词：禽流感NS1蛋白胶体金试纸条
- H9亚型禽流感病毒免疫层析快速检测试剂盒的研制及应用被引量：4
- 2009年
- 利用胶体金免疫层析技术,在建立H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法的基础上组装成试剂盒,试剂盒由试纸卡、稀释液、样品管、塑料吸管、一次性手套及说明书组成。对试剂盒的特异性、敏感性、保存期和重复性等进行了测定。结果表明,试剂盒在室温可以保存6个月,4℃可以保存12个月;与HA试验相比特异性强、灵敏度高、重复性好,操作简单、方便、快捷,能在10min内准确检测出样品中是否含有H9亚型禽流感病毒。先后制备了5批试剂盒,对武汉市及周边地区的鸡场共抽检498份样品,经病毒分离鉴定准确率达到100%。
- 彭伏虎张殊慧王政宋念华方羽张文通张展英毕丁仁
- 关键词：H9亚型禽流感病毒免疫层析快速检测试剂盒
- 禽流感病毒M2蛋白的原核表达及免疫原性研究被引量：4
- 2009年
- 基质蛋白M2是流感病毒的3种表面抗原之一,也是流感病毒中最为保守的蛋白之一,被认为是具有交叉保护能力的流感疫苗的理想候选抗原。论文从H9N2亚型禽流感病毒感染的狗肾传代(madindarby canine kidney,MDCK)细胞中克隆全长M2基因,并采用OE-PCR(overlap extension,PCR)得到缺失跨膜区的M2基因(sM2)。将sM2基因克隆到pGEX-KG原核表达载体,在大肠埃希菌中获得表达量较高的融合蛋白GST-sM2,而且以可溶形式存在。利用亲和层析的方法纯化蛋白,经Western blot证明,GST-sM2蛋白具有良好的免疫原性。ELISA检测发现GST-sM2能与H9、H5和H7亚型禽流感病毒抗体均发生反应。进一步将纯化蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c鼠,结果在免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体,为开发具有交叉保护力的禽流感疫苗奠定了基础。
- 吴仁蔚毕丁仁
- 关键词：禽流感病毒原核表达
- 免疫胶体金试纸条检测肉鸡感染H9N2亚型禽流感NS1抗体消长规律的研究
- 禽流感病毒非结构蛋白(AIV-NS1)抗体检测可作为禽流感野毒感染的诊断标签。在禽流感NS1抗体鉴别诊断试纸条研制成功的基础上,我们采用人工感染的方法,探讨了感染肉鸡体内NS1特异性抗体的消长规律。结果表明,肉鸡感染后第...
- 张文泽崔卫涛肖运才刘梅王喜亮胡思顺毕丁仁
- 关键词：H9N2亚型禽流感非结构蛋白肉鸡
- 文献传递
