国家教育部博士点基金(20093515110005)
- 作品数：8 被引量：37H指数：3
- 相关作者：林玉玲赖钟雄陈裕坤王亚婷曾丽兰更多>>
- 相关机构：福建农林大学福建省农业科学院更多>>
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- 龙眼胚性愈伤组织miR398a前体的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析被引量：3
- 2011年
- 为了解miR398a在龙眼体胚发生中的调控机制,以龙眼胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR法克隆miR398a前体序列,最终成功克隆了长83 bp的龙眼miR398a前体序列(GenBank登录号:FJ973472);该前体与其它物种的miR398前体序列具有较高的同源性,并包含miR398a的成熟序列;利用qPCR技术研究该基因在龙眼体胚发生发育过程中的表达情况,定量分析结果表明,随着龙眼体胚的发育,pre-miR398a在不同胚性培养物中的转录水平存在显著差异:在不完全胚性紧实结构表达量最高,球形胚阶段次之,随后是胚性紧实球形结构、胚性愈伤组织II及松散型胚性愈伤组织,在心形胚、鱼雷形胚阶段和子叶形胚阶段表达量较低。说明pre-miR398a在龙眼体胚发生过程中的表达具有组织特异性和一定的时序性。
- 林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生克隆
- 渗透胁迫对龙眼胚性愈伤组织SOD活性的影响被引量：11
- 2014年
- 以龙眼胚性愈伤组织LC2细胞系为材料,研究聚乙二醇(PEG)、甘露醇和蔗糖等渗透胁迫对龙眼胚性愈伤组织SOD酶活性的影响.结果表明:与对照相比,随着PEG胁迫强度的增加,SOD活性在轻度(10 g·L-1聚乙二醇)、中度(20 g·L-1聚乙二醇)胁迫下上升,严重(30 g·L-1聚乙二醇)胁迫下呈快速下降趋势;随着甘露醇浓度的提高,SOD活性不断升高,且一直维持在一个较高的水平上,直到浓度达到100 g·L-1时才开始呈现缓慢下降的趋势;随着蔗糖浓度的升高,SOD活性不断升高,直到蔗糖浓度为70 g·L-1时开始下降,70-90 g·L-1之间的SOD活性下降缓慢.甘露醇和蔗糖处理比聚乙二醇处理的SOD活性高,下降的速度也较缓慢,说明适当高浓度的甘露醇和蔗糖,可以有效提高植物细胞活力,延缓细胞衰老.
- 曾丽兰林玉玲王亚婷赖钟雄
- 关键词：龙眼胚性愈伤组织渗透胁迫PEGSOD活性
- 植物胚胎发育MicroRNA研究进展被引量：1
- 2010年
- MicroRNA(miRNA)为长度约22 nt的不编码蛋白的单链新型调控小分子RNA,对植物生长发育和抵抗胁迫等过程具有重要的调控作用。在阐述植物发育中miRNA作用的基础上,进一步介绍植物胚胎发育miRNA的研究进展。
- 林玉玲赖钟雄
- 关键词：MICRORNA植物胚胎体细胞胚胎发生发育
- 龙眼胚性愈伤组织Cu/Zn-SOD分子伴侣基因CCS的克隆及其在体胚发生过程中的表达分析被引量：9
- 2012年
- 为了解Cu/Zn超氧化物歧化酶分子伴侣基因(CCS)在龙眼体胚发生过程中的表达调控机制,以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR法,克隆了长960 bp含有完整开放阅读框的龙眼DlCCS核酸序列,其编码一个含有319个氨基酸的蛋白质(GenBank登录号:FJ973472).生物信息学分析显示:该蛋白为亲水的、稳定的、含有跨膜结构域的酸性蛋白质,定位于叶绿体;与毛果杨、葡萄、拟南芥、水稻和锦鸡儿具有较高同源性,含有植物CCS蛋白所特有的3个保守结构域;预测其通过不同的磷酸化方式,改变酶活性及蛋白构象,参与龙眼体胚中超氧化物代谢以及金属离子转运等生物学过程,在氧化还原过程中发挥作用.利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究该基因在龙眼体胚发生发育过程中的表达情况,结果显示,从松散型胚性愈伤组织(Stage 1)到胚性紧实球形结构阶段(Stage 4),DlCCSmRNA的转录水平较低且波动小;当胚性紧实球形结构进一步发育到子叶形胚阶段(Stage 8),其表达量迅速增加,在成熟胚阶段(Stage 9)达到最高峰。
- 林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生CCS克隆
- 龙眼胚性愈伤组织DlGRAS4与DlGRAS54基因的克隆及表达分析被引量：7
- 2014年
- 以龙眼松散型胚性愈伤组织为实验材料,采用RT-PCR结合RACE法,克隆了植物特异转录调控因子DlGRAS4和DlGRAS54的cDNA全长序列和DNA序列,并进行生物信息学以及表达分析。结果表明:DlGRAS4全长1 668bp,开放阅读框(ORF)1 296bp,编码431个氨基酸(GenBank登录号:KC127683);DlGRAS54全长2 113bp,ORF 1 659bp,编码552个氨基酸(GenBank登录号:KC127684);DlGRAS54的DNA序列在5′-UTR含有1个1 533bp的内含子。生物信息学分析表明:DlGRAS4和GRAS54是不稳定亲水蛋白,不含信号肽,具有跨膜结构和GRAS家族的保守结构域,亚细胞定位于细胞膜中;与毛果杨、葡萄、蓖麻和可可等具有较高的同源性。系统进化树分析显示,DlGRAS54与拟南芥AtPAT1、葡萄VvPAT1、毛果杨PtPAT1、大豆GmPAT1处于同一分枝;DlGRAS4与拟南芥AtSCL23、玉米ZmSCL23处于同一分枝。推测DlGRAS4和DlGRAS54是GRAS基因家族的成员。qPCR结果表明,DlGRAS4在整个发育阶段转录水平呈"W"型变化趋势,在球形胚和子叶形胚阶段的表达量达最大值;DlGRAS54在整个发育阶段的转录水平呈"M"型变化趋势,在球形胚和鱼雷形胚阶段表达量达最大值,表明DlGRAS4和DlGRAS54主要在发育的中晚期起作用。外源赤霉素处理后DlGRAS4和DlGRAS54的表达量明显上调,说明DlGRAS4和DlGRAS54对赤霉素处理能做出积极的反应。
- 陈裕坤林玉玲田奇琳林丽霞赖瑞联赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生GRAS生物信息学实时荧光定量PCR
- 龙眼胚性愈伤组织fw2.2家族2个基因的克隆与分析被引量：2
- 2012年
- fruit weight 2.2(fw2.2)是植物中控制果实重量的重要数量性状的主效基因。以龙眼转录组数据库为基础,采用同源克隆法及RACE技术,从龙眼的胚性愈伤组织中获得fw2.2家族的2个cDNA全长序列,命名为Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-1,并对其核甘酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明:Dlfw2.2-1基因的cDNA全长为970 bp,编码184个氨基酸;Dlfw2.2-2基因的cDNA全长为941 bp,编码175个氨基酸。Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-2的核甘酸序列及其推导的氨基酸序列与其它植物的fw2.2具有较高的同源性,亚细胞定位于细胞质膜,不含信号肽,具有跨膜结构与典型的与PLAC8同源的富半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich Protein)的保守结构域。植物中fw2.2系统进化树分析结果表明,Dlfw2.2-1和Dlfw2.2-2为同一分枝,与番茄和油梨的fw2.2的距离最近。因此,推测Dlfw2.2-1与Dlfw2.2-2属于fw2.2基因家族的2个成员。
- 陈裕坤林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼胚性愈伤组织果实重量基因克隆生物信息学分析
- 龙眼GPX基因的克隆、原核表达及其在体胚发生过程中的表达分析被引量：2
- 2013年
- 采用RT-PCR与RACE相结合的方法,从龙眼胚性愈伤组织中克隆了长947 bp含有完整开放阅读框的龙眼DlGPX cDNA序列(GenBank登录号为EU364813)和长度为1 736 bp的DNA序列(GenBank登录号为EU680970)。其编码1个含有168个氨基酸的蛋白质。DlGPX基因中含有5个内含子,均符合真核生物内含子通用的GT-AG法则。生物信息学分析显示:该蛋白为亲水的酸性蛋白质,定位于叶绿体;与其他植物的GPX有较高的同源性。将该基因构建成原核表达载体,经IPTG诱导表达了1个分子量约为23 ku的蛋白。利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究该基因在龙眼体胚发生发育过程中的表达情况,结果显示,从松散型胚性愈伤组织到不完全胚性紧实球形结构阶段,DlGPX mRNA的转录水平逐渐升高,在胚性紧实球形结构阶段降到最低水平,子叶形胚阶段又上升到与不完全胚性紧实球形结构阶段相当的水平。
- 陈义挺赖钟雄方智振蔡英卿林玉玲李焕苓陈登云
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生GPX实时荧光定量PCR
- 龙眼胚性愈伤组织miR398b前体克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析被引量：2
- 2012年
- 以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,对miR398b前体进行克隆,并分析其在龙眼体胚发生过程中的表达。结果表明:获得长85 bp的龙眼miR398b前体序列(GenBank登录号:GU968639),该前体与葡萄、毛果杨的miR398b前体序列具有较高的同源性,并包含长21 bp的miR398b成熟序列;其在龙眼体胚发生过程中的表达具有组织特异性,主要在球形胚和子叶形胚阶段大量积累,在松散型胚性愈伤组织、胚性愈伤组织II、不完全胚性紧实结构、心形胚和成熟胚阶段中等表达,在鱼雷形胚阶段几乎不表达,说明pre-miR398b主要在龙眼球形胚和子叶形胚阶段起主要作用。
- 林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生克隆
