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稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建: 2014年; 为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。; 魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新; 关键词：SH-SY5Y 细胞克隆

三邻甲苯磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞calpain活性的影响被引量：1: 2014年; 目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)calpain活性的影响。方法用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用不同浓度的TOCP(0、0.25、0.5、1.0mM)染毒未分化或分化的SH-SY5Y细胞不同时间(12、24、48h),用20μM盐酸维拉帕米(verapamil)和100μM二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)预处理细胞15min后染毒TOCP 1.0mM 48h,采用荧光分光光度法测calpain活性。结果随着染毒浓度和时间的增加,TOCP活化未分化与分化的SH-SY5Y细胞calpain活性(P<0.05),钙通道抑制剂verapamil和2-APB预处理细胞能抑制TOCP引起的calpain活性升高(P<0.05)。结论 TOCP通过SH-SY5Y细胞内钙紊乱而活化calpain活性。; 肖双魏传杰唐凯玲李盛龙鼎新; 关键词：SH-SY5Y细胞钙蛋白酶盐酸维拉帕米

人RPS6KA3基因及蛋白质的生物信息学分析被引量：2: 2019年; 核糖体蛋白S6激酶A3(ribosomal protein S6 kinase A3,RPS6KA3)具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,在机体的生理过程中发挥重要作用。为了研究RPS6KA3基因的性质和功能,利用一系列生物信息学分析软件对该基因序列及其编码蛋白的结构和特性进行生物信息学分析。结果表明,人RPS6KA3基因共编码740个氨基酸组成的多肽,其在进化过程中高度保守,隶属于PKc_like超家族,是一种等电点为6.41的不稳定的水溶性蛋白,无信号肽序列和跨膜结构。该蛋白定位于细胞质的可能性最大,主要的二级结构为α-螺旋结构,具有多个磷酸化功能位点。与RPS6KA3相互作用的蛋白主要是MAPK信号途径相关蛋白、mTOR信号途径相关蛋白及蛋白合成相关蛋白等。分析结果为进一步研究RPS6KA3在生命过程中的作用提供重要信息。; 唐乖杨越朱家佳龙鼎新; 关键词：生物信息学信号通路

三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展被引量：1: 2014年; 三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性(OPIDN)为特征,造成机体永久性损伤。TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施。全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义。; 肖双龙鼎新; 关键词：迟发性神经毒性钙

斑马鱼在发育毒理学研究中的应用被引量：3: 2016年; 斑马鱼作为一种标准模式脊椎动物以其独特的优势被广泛应用于发育毒理学研究,目前研究工作涉及到几乎斑马鱼所有器官系统的发育过程及在毒理学中的应用。本文从心脏发育毒性、血管和血细胞发育毒性、神经发育毒性、肝脏及肾脏发育毒性、体节、肌肉和骨骼发育毒性等方面综述了斑马鱼应用研究进展。; 李盛龙鼎新; 关键词：斑马鱼胚胎发育毒理学

三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响被引量：1: 2012年; 目的观察三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸(ATRA)为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。; 呼丹李小玲龙鼎新; 关键词：全反式维甲酸分化

DAPT阻断Notch信号通路对TOCP诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的影响: 目的探讨Notch在三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)诱发SH-SY5Y细胞神经毒性中的关系,进一步阐述TOCP神经毒性的作用机制.方法采用Notch信号通路阻断剂DA...; 唐凯玲龙鼎新; 关键词：TOCP SH-SY5Y NOTCH信号通路细胞骨架

pLC3-EGFP真核表达载体的构建与表达: 2011年; 目的构建人微管相关蛋白轻链3(LC3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达载体(pLC3-EGFP)并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定。将表达质粒pLC3-EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,western blot检测LC3-EGFP蛋白的表达。结果测序结果表明,从人胚肾HEK293T细胞中所获得的LC3 cDNAs含有378个碱基,与Genbank(NM_022818)序列完全一致。构建的重组真核表达载体pLC3-EGFP经鉴定证实LC3基因已完全正确亚克隆到pEGFP—N3;LC3-EGFP融合蛋白能够在HEK293T细胞中表达,并主要定位于细胞质中。结论成功构建具有报告基因—增强绿色荧光蛋白基因的重组真核表达载体pLC3-EGFP并在HEK293T细胞中很好地表达,实验结果为研究细胞自噬的进程及机制提供了实验基础。; 龙鼎新李小玲; 关键词：自噬 LC3 克隆

Notch信号通路在相关疾病中的研究进展被引量：11: 2016年; Notch信号通路在进化上高度保守的一条转导系统,调控细胞的发育、增殖和分化等。Notch信号通路参与多种疾病过程,如肿瘤发生,神经退行性疾病,遗传性疾病等,调控神经系统和免疫系统等生理功能。本文进一步阐述Notch信号通路在肿瘤,阿尔茨海默症,动脉粥样硬化等疾病中的作用。; 唐凯玲龙鼎新; 关键词：NOTCH信号通路神经系统免疫系统心血管系统遗传疾病

PKCα在TOCP抑制SK-N-SH细胞自噬中的作用及机制研究: 目的：　　探讨PKC?在TOCP影响SK-N-SH神经细胞自噬的作用及机制。　　方法：　　1.SK-N-SH细胞经TOCP(0~1mmol/L)染毒，通过MTT法测定该化合物对细胞增殖的影响，并利用SPSS软件算出SK-...; 邓强; 关键词：PKCΑ TOCP 细胞自噬; 文献传递

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