国家自然科学基金(81172717)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 苯并(a)芘诱导恶性转化的BEAS-2B细胞中miRNA和mRNA表达谱的改变
- 2021年
- 目的:探索与苯并(a)芘[B(a)P]诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B细胞)恶性转化相关的miRNA和mRNA。方法:采用5 mg/L的B(a)P对BEAS-2B细胞进行染毒。取染毒和未染毒细胞,分别采用平板克隆形成实验、划痕实验、MTT法检测克隆形成能力、迁移能力和增殖活性;采用芯片技术检测miRNA和mRNA表达谱,以FC≥2.0且P<0.05为标准筛选出差异表达miRNA和mRNA,对其进行GO注释及KEGG通路分析。采用实时荧光定量PCR法检测两组细胞中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521的表达。结果:染毒组细胞克隆形成能力、迁移能力和增殖活性均明显增强(P<0.05)。芯片分析结果显示,染毒组和未染毒组细胞在不同的簇中;共筛选出127种差异表达miRNA(29种表达上调,98种表达下调)和159种差异表达mRNA(99种表达上调,60种表达下调)。GO注释及KEGG通路分析结果显示,差异表达mRNA可能参与了细胞活素-受体相互作用介导的信号通路、p53信号通路介导的细胞凋亡等。染毒组细胞中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521的表达低于未染毒组(P<0.05),与芯片结果一致。结论:筛选出B(a)P诱导BEAS-2B恶性转化相关的miRNA和mRNA。
- 栗振凯李中秋孟丽雅张佳彤张巧
- 关键词：苯并(A)芘BEAS-2B细胞肺癌
- NF-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及肿瘤坏死因子-α分泌的影响被引量：4
- 2018年
- 目的探讨核因子(NF)-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法用NF-κB抑制剂SN50处理肺癌细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养液上清中TNF-α含量,Western印迹测定细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)B1、Cyclin D1、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、NF-κBp65蛋白水平。结果 SN50能够抑制肺癌细胞的增殖,且随着SN50作用浓度和作用时间的增加抑制增殖作用越强。SN50组凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。SN50组肺癌细胞G2/M比例明显高于对照组(P<0.05)。SN50组TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05),Cyclin B1、Cyclin D1、NF-κBp65蛋白水平明显低于对照组,而酶切Caspase-3、Bax水平明显高于对照组(P<0.05)。结论抑制NF-κB信号通路可以阻碍肺癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,促进细胞中酶切Caspase-3、Bax表达,下调细胞中Cyclin B1、Cyclin D1蛋白水平。
- 赵旭王晓寒广东张铭
- 关键词：肺癌细胞周期
- 肿瘤坏死因子-α和NF-κB在单核巨噬细胞促煤焦沥青烟气提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和NF．KB在人单核巨噬细胞系（THP-1）细胞促煤焦沥青烟气提取物（CTPE）诱导人支气管上皮细胞系（BEAS-2B）细胞恶性转化中的作用。方法在第10代BEAS-2B和THP-1细胞共培养组中分别加入NF—KB的抑制剂一吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）和TNF-α中和抗体，用细胞周期检测、染色体核型分析和软琼脂集落形成实验检测第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组BEAS-2B细胞的恶性转化情况，并与第10代、第20代共培养组进行比较；采用实时定量PCR和免疫印迹法（Westernblot）法检测各组BEAS．2B细胞中TNFR相关因子2（TRAF2）和细胞周期蛋白D1（CyclinDl）基因及其蛋白的表达。结果第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组BEAS．2B细胞中S期细胞的比例分别为（33．97％±2．16％）和（34．29％±2．04％），明显低于第20代共培养组（44．46％±0．83％％），差异有统计学意义（P〈0．05）。第20代PDTC组和TNF-α中和抗体组100个细胞中出现异常染色体核型的细胞数量为40个和37个，而第20代共培养组为75个，差异有统计学意义（P〈0．05）。第20代PDTC组软琼脂集落形成数（15．17±2．48）个，集落形成率为（1．51‰±0．25‰），第20代TNF—α中和抗体组集落形成数为（13．33±2．58）个；集落形成率为（1．33‰±0．26‰），均明显低于20代共培养组[集落形成数：（172．33±12．09）个和集落形成率：（17．23‰±1．20‰）]，差异有统计学意义（P〈0．05）；PDTC组和TNF．d中和抗体组TRAF2和CyclinD1基因及其蛋白的表达明显低于第20代共培养组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TNF．仅和NF-KB在THP-1细胞促进煤焦沥青烟气提取物诱导BEAS-2B细胞恶性转化的早期阶段发挥重要的作用，并可能通过影响TRAF2和CyelinD1的表达促使细胞恶性变发生。
- 冯斐斐张巧周凡静吴拥军吴逸明
- 关键词：巨噬细胞肿瘤坏死因子NF-KB
- CSC诱导BEAS-2B细胞恶性转化中miRNA表达谱变化
- 2018年
- 目的通过烟草烟雾凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)慢性染毒永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B体外构建恶性转化细胞模型,miRNA芯片技术筛选模型中差异表达的miRNAs,发现与恶性转化相关的miRNAs,为进一步研究CSC诱导恶性转化的作用机制提供实验基础。方法CCK-8检测细胞存活率,确定CSC染毒终浓度。划痕实验、克隆形成实验、MTT实验及凋亡检测评估细胞恶性转化情况。MiRNAs芯片检测BEAS-2B和CSC30组细胞,明确差异表达谱。表达下调的hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521进行RT-PCR验证。结果CSC诱导的恶性转化细胞迁移能力、克隆形成能力和增殖活力明显增强,凋亡率明显下降。相对于BEAS-2B组,CSC30组细胞中有78种miRANs差异表达,其中52种表达上调,26种表达下调。RT-PCR验证hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521表达下调与芯片结果一致。结论CSC可诱导BEAS-2B细胞发生恶性转化,采用miRNA芯片技术筛选到miRNA差异表达谱,其可能与CSC诱导恶行转化的发生发展有关。
- 张亚平张佳彤杨萨李中秋周洋洋张巧
- 关键词：CSCBEAS-2BMIRNA芯片MIRNA
- 吸烟人群外周血淋巴细胞DNA损伤的研究
- 2014年
- 目的:研究通过测定河南某县健康男性中吸烟和不吸烟人群外周血淋巴细胞的DNA损伤情况,探讨吸烟与DNA损伤的关系,为进一步研究吸烟致癌机制积累资料。方法:采用酶联免疫吸附试验检测样本血清中柯替宁含量和血浆中多环芳烃DNA加合物的水平;采用彗星试验检测研究对象的DNA单链断裂损伤;采用微核试验检测研究对象外周血淋巴细胞的微核率。结果:与不吸烟组相比,吸烟组的柯替宁含量、PAH-DNA含量、彗星尾长和彗星拖尾率以及微核率显著增高。结论:吸烟具有DNA损伤效应,是诱发人体遗传物质损伤的重要诱变因素之一。
- 李运涛霍俊章张佳彤冯伟杰孙东杰孙献周张巧
- 关键词：吸烟人群DNA损伤单细胞凝胶电泳试验微核试验
- 烟草烟雾凝集物对BEAS-2B细胞氧化应激的影响被引量：2
- 2019年
- 目的:研究烟草烟雾凝集物(CSC)对BEAS-2B细胞氧化应激的影响。方法:采用0.02、0.04、0.06和0.08g/L的CSC染毒BEAS-2B细胞24h,并设立空白对照组和DMSO溶剂对照组。分别用CCK-8法和划痕实验检测细胞存活率和细胞迁移能力,荧光探针DCFH-DA法检测BEAS-2B细胞内活性氧(ROS)水平,酶标仪测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:CCK-8结果显示CSC以剂量依赖性的方式降低BEAS-2B细胞存活率;随着CSC浓度的升高,细胞出现空泡增多、针刺样突起、细胞膜及细胞核轮廓模糊、细胞面积明显增大等形态学改变。与空白对照组、DMSO溶剂对照组相比,CSC染毒组细胞迁移距离增加,细胞内ROS水平、MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05)。结论:CSC可引起BEAS-2B细胞发生氧化应激反应。
- 杨萨周洋洋张佳彤李中秋于琪栗振凯殷晓涵张巧
- 关键词：BEAS-2B细胞氧化应激
- 烟草烟雾凝集物对BEAS-2B细胞caspase-1及相关炎性细胞因子表达的影响被引量：6
- 2015年
- 目的观察烟草烟雾凝集物CSC(cigarette smoke condensate,CSC)刺激永生化人支气管上皮细胞(Immortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B),其caspase-1及相关炎性细胞因子的改变。方法分别以终浓度为0 mg/ml(空白对照与DMSO溶剂对照)、0.015 mg/ml(1/4 IC50)、0.03mg/ml(1/2 IC50)及0.06 mg/ml(IC50)的CSC溶液作用于BEAS-2B细胞8、16和24 h,检测caspase-1活性,并用ELISA方法检测细胞内caspase-1活性及含量和细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的水平。结果随CSC刺激浓度增加,BEAS-2B细胞抑制率增大,CSC对BEAS-2B细胞的半数抑制浓度约为0.06 mg/ml。不同浓度CSC处理细胞8和16 h后,1/4IC50、1/2IC50与IC50组caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P<0.05),且随染毒浓度增高而增高(P<0.05);不同浓度CSC处理细胞24h后,各染毒组细胞caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P<0.05),但1/2IC50组与IC50组caspase-1活性及含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CSC处理BEAS-2B细胞可引起caspase-1活化,且IL-1β、IL-18表达水平增高,提示可能存在caspase-1依赖的细胞焦亡(pyroptosis)。
- 李广康陈健东孙东杰肖新华陈玉莹许丹张佳彤冯斐斐张巧
- 关键词：CASPASE-1PYROPTOSISBEAS-2B细胞
- 香烟烟雾冷凝物急性染毒对16HBE细胞Rap2B基因表达的影响
- 2012年
- 目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16HBE细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂量,荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平,Western Blot检测其蛋白表达水平。结果 CSC对16HBE细胞有毒性作用,半数抑制浓度(IC50)为(0.08±0.006)mg/ml;CSC染毒16HBE细胞24 h后,细胞形态发生一定改变,高剂量组细胞出现明显形态学改变;与对照组比较,1/8 IC50剂量组mRNA和蛋白表达水平上调较高(P<0.05),随剂量组浓度增高mRNA和蛋白表达下调至最低(IC50组,P<0.05)。结论 Rap2B基因的表达在一定范围随着染毒浓度的改变呈现先升高后下降的趋势,提示Rap2B基因可能作为CSC靶基因在其急性染毒过程中发挥一定的作用。
- 周明龚春梅杨淋清霍俊章庄志雄夏菠吴德生刘建军徐新云张巧
