国家自然科学基金(30900267)
- 作品数:5 被引量:8H指数:1
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- Kv7通道开放剂与阿司匹林联合应用镇痛作用的研究被引量:1
- 2020年
- 目的探讨Kv7通道开放剂氟吡汀、瑞替加滨与阿司匹林联合应用的镇痛作用,为临床联合用药提供科学依据。方法实验分为对照组、阿司匹林组、氟吡汀组、瑞替加滨组、阿司匹林+瑞替加滨组、阿司匹林+氟吡汀组。采用冰醋酸致扭体法、热板法评价各组药物的镇痛效果。结果扭体法中,与阿司匹林组相比,阿司匹林+氟吡汀组的扭体次数明显减少(P<0.01),阿司匹林+瑞替加滨组的扭体反应潜伏期明显延长(P<0.01),扭体次数明显减少(P<0.01);热板法中,与阿司匹林组相比,阿司匹林+氟吡汀组与阿司匹林+瑞替加滨组的舔后足潜伏期延长率均增加,其中,阿司匹林+瑞替加滨组在30 min、60 min时的舔后足潜伏期延长率与阿司匹林组相比有明显差异(P<0.05)。结论Kv7通道开放剂氟吡汀、瑞替加滨可以增强阿司匹林的镇痛作用。
- 张佳瑜徐晨悦赵伊珂周彦宏金鑫张国红赵志英
- 关键词:阿司匹林镇痛作用联合用药
- FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响
- 2012年
- 目的构建FLAG标记的内向整流钾通道(inwardly rectifying K channel,Kir)2.3通道蛋白,为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础。方法运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.3通道氨基末端,构建重组质粒DNA,FLAG-Kir2.3-pGEMHE;采用菌落PCR方法挑取阳性克隆,表达于非洲爪蟾卵母细胞,验证加入标记后是否影响Kir2.3通道蛋白的功能;进行免疫细胞化学实验,检测FLAG标记短肽表达情况。结果经测序验证,FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功,没有碱基突变。FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能,FLAG-Kir2.3成功表达于非洲爪蟾卵母细胞,双电极电压钳可以记录到电流。免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达。结论成功构建重组质粒DNA,FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达。
- 赵志英朱宏谦张哲刘丽张国红
- 关键词:聚合酶链反应免疫组织化学
- KLF4通过上调Mfn2表达减轻棕榈酸致L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗被引量:6
- 2014年
- 目的探讨Krüppel样因子(KLF)4通过调控线粒体融合蛋白(Mfn)2的表达对大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗模型,随机分为对照组和转染组。对照组转染腺病毒空载体(Ad),转染组转染KLF4腺病毒表达载体(Ad-KLF4)和(或)靶向Mfn2的小干扰RNA(Ad-Mfn2-siRNA)。采用Real-time PCR和Western印迹检测两组KLF4、Mfn2、胰岛素受体(IR)和葡萄糖转运蛋白(GLUT)4的表达水平,采用葡萄糖氧化酶法检测两组培养液中的葡萄糖浓度。结果与对照组比较,棕榈酸诱导组对葡萄糖的摄取量显著降低,KLF4、Mfn2、IR、GLUT4表达显著下调。KLF4过表达可显著提高细胞对胰岛素的敏感性,并上调Mfn2、IR、GLUT4表达。利用siRNA沉默Mfn2基因可明显阻断KLF4的作用。结论 KLF4可改善骨骼肌细胞的胰岛素抵抗,其机制可能与上调Mfn2表达有关。
- 张哲赵志英王超
- 关键词:线粒体融合蛋白2骨骼肌细胞胰岛素抵抗
- Kir2.1/Kir2.3嵌合体的构建与表达被引量:1
- 2013年
- 目的构建Kir2.1/Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础。方法利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1C3,NIP3C1,N3P1C3。将不同的嵌合体质粒分别用NheI线性化后,转录为cRNA表达于非洲爪蟾卵母细胞,用双电极电压钳记录电流。结果不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒构建成功,在非洲爪蟾卵母细胞上可以记录到电流表达。结论成功构建Kir2.1/Kir2.3嵌合体并完成了嵌合体通道的异源性表达和电压钳记录。
- 赵志英朱宏谦张璇刘丽张国红
- 关键词:钾通道嵌合体重叠延伸PCR非洲爪蟾卵母细胞
- 不同日龄大鼠颈上交感神经节神经元电转染方法
- 2011年
- 目的建立一种高效电转染不同日龄大鼠颈上交感神经节(superior cervical sympathetic ganglion,SCG)神经元细胞的方法。提高转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率。方法用传统的及经改良的神经元培养液分别培养电转染后的7日龄、14日龄和40日龄SD大鼠SCG细胞,24 h后用台盼蓝染色方法观察并计算细胞成活率;通过改变质粒DNA和siRNA与转染液比例,优化转染条件,于转染24h后在共聚焦显微镜下观察并计算转染效率或干扰效率。结果改良培养液可使14日龄以上SD大鼠SCG细胞转染后成活率达到75%以上,明显高于传统培养液转染后的成活率(P<0.01),且结果稳定,细胞状态良好,能够满足后续实验研究的要求;优化转染条件后,DNA的转染率及siRNA的干扰率显著提高,当DNA与转染液比例为1∶100(μg∶μL)时,细胞转染率最高;当siRNA与转染液比例为1∶50(μg∶μL)时干扰率最高。结论通过改良神经元培养液及优化转染条件,成功提高了电转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率,利用电转染方法可成功转染不同日龄SD大鼠SCG神经元。
- 刘丽赵志英张海林
- 关键词:电转染SIRNA