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气相色谱-质谱大体积进样法测定果汁中90种农药残留被引量：24: 2015年; 采用程序升温大体积进样技术（PTV-LVI）及Qu ECh ERS方法建立了果汁中90种农药多残留的气相色谱-质谱分析方法。样品用乙腈提取,经Mg SO4和Na Cl除水后,以PSA和C18柱净化,用大体积进样技术的气相色谱-质谱进行测定。PTV-LVI优化参数为：初始温度100℃、分流出口吹扫流量50 m L/min、分流排空时间1.5 min、进样速度2μL/s。结果表明：90种农药在0.05~10μg/L的范围内呈良好线性关系,相关系数（R2）为0.9879~0.9999,相对标准偏差为3.4%~15.6%,平均回收率在70.3%~119.2%之间。90种农药的检出限均低于10μg/kg,定量限低于20μg/kg。本方法快速、简便、灵敏度高、重现性好,适用于果汁中的多种类农药残留分析。; 张弛宋莹潘家荣焦必宁睢珂梁世正冯涛傅丽丽; 关键词：果汁农药多残留大体积进样气相色谱-质谱 QUECHERS

抗对硫磷基因工程新型抗体的制备及鉴定被引量：2: 2010年; 【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sa),并将该融合基因(scfv-sa)插入到表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,制备融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sa的表达,Ni+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力。【结果】结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中该融合基因能表达出分子量约为46kDa的融合蛋白,形成了四价结构域-四价聚合抗体。ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合,抗体效价在1:1×106以上,亲和常数为4.25×107L/mol。【结论】制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合,与单克隆抗体相比,抗原结合位点显著增加,ELISA检测灵敏度显著提高。; 乔亚奇潘家荣王磊于海英陈明张维张付凯; 关键词：对硫磷原核表达

抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定被引量：5: 2012年; 为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。; 张付凯乔亚奇王磊兰丽平潘家荣; 关键词：原核表达

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定被引量：2: 2010年; 以咪唑乙醇为原料,与6-溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4-二氯苯基)-2-(1-咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000的抗体,采用间接竞争ELISA法测定抗体的IC50值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA检测试剂盒的研制。; 周映霞张丽杰潘家荣焦必宁王磊; 关键词：抑霉唑半抗原人工抗原

气相色谱-串联质谱法快速检测水果中的多效唑残留被引量：48: 2011年; 建立了农药残留快速检测(QuEChERS)-气相色谱-串联质谱法检测桃、樱桃和荔枝中多效唑残留的分析方法。样品用乙腈快速提取,无水MgSO4和NaCl除水后,经N-丙基乙二胺和石墨化炭黑净化,用气相色谱-串联质谱分析。采用多反应监测正离子模式检测,定性离子对为m/z236/125,236/167,采用m/z236/125进行定量分析。在0.005,0.05和0.5mg/kg添加水平下,样品平均回收率为86.7%～126.7%;相对标准偏差为2.0%～19.6%;在桃、樱桃和荔枝中的检出限分别为0.4,0.5和0.5μg/kg。结果表明:本方法简便、快速、安全、价格低廉,重现性良好,可用于水果样品中多效唑残留的快速确证检测。; 宋莹张耀海黄霞潘家荣焦必宁; 关键词：多效唑水果

抗微囊藻毒素单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定被引量：1: 2010年; 利用RT-PCR方法从抗微囊藻毒素-LR(MC-LR)单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增出抗体的V_H和V_L基因,构建了抗MC-LR分子的单链抗体(scFv)基因。SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,该单链抗体基因在大肠杆菌Origami 2中特异性表达出分子量约为30kD的融合蛋白。通过Ni-NTA金属亲和层析法对可溶性表达产物进行纯化,获得的目的蛋白浓度为0.115mg/mL。ELISA反应结果表明该单链抗体能与MC-LR特异性结合。此研究为制备多价高亲和力抗MC-LR抗体奠定了基础。; 宋丽敏张维陈明林敏潘家荣; 关键词：单链抗体原核表达 ELISA

Syntheses of haptens and hapten-protein conjugates for insecticide propoxur and cyhalothrin被引量：3: 2010年; A facile procedure was described for the hapten design of the N-methylcarbamate insecticide propoxur.Two new haptens of propoxur(hapten 1a and hapten 1b) were synthesized by introducing appropriate spacers in the pesticide aromatic moiety of the analyte molecular structure.First,the propoxur reacted with nitric acid to yield the intermediate product.Then hapten 1a was prepared via the reduction of the intermediate product,and hapten 1b was formed by the acylation of hapten 1a with succinic anhydride.In addition,we have also developed a simple method to prepare hapten 2 for the pyrethroid insecticide cyhalothrin,which only requires two steps including the reactions of nitration and reduction.Three haptens were coupled to carrier proteins to prepare the corresponding artificial antigens.The molecular structures of these three haptens were identified by 1H NMR and MS,and those of the artificial antigens were confirmed by UV-vis.; Sang, GuangMing Luo, ShiNeng Lin, JianGuo Qiu, Ling Chen, ChuanQing Yang, HaiLin Xia, YongMei; 关键词：HAPTEN INSECTICIDE

抗对硫磷基因工程抗体ScFv的制备及其初步鉴定被引量：2: 2008年; 用一段45个核苷酸的片段连接抗对硫磷抗体重链和轻链可变区基因片段VH和VL,获得了抗对硫磷单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,构建了抗对硫磷scFv基因原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot分析显示,该单链抗体基因能在大肠杆菌Origami 2中特异性表达,融合蛋白分子量约为28kD。用Ni-NTA金属亲和层析法对可溶性表达产物进行纯化,得到目的蛋白纯度为74.8%;ELISA反应结果证明,该单链抗体可以与对硫磷发生特异性反应。; 宋丽敏张维林敏潘家荣; 关键词：对硫磷单链抗体原核表达

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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z449)