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RNAi抑制TLR9表达影响小鼠骨髓来源树突状细胞对CpG的应答被引量：3: 2009年; 为了探讨特异性降低Toll样受体9(TLR9)表达后,小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)对CpG刺激的应答反应,我们合成了特异性干扰TLR9表达的小干扰RNA(small-interference RNA,siRNA),用Lipofectamine2000转入DC,利用Block-iT检测评估了转染效率;RT-PCR方法检测了干扰效果;Annexin V和PI双染检测了细胞凋亡率。进一步在CpG作用后,用流式细胞术分析了DC表面标志CD40和MHC II的表达以及DC吞噬FITC-dextran(右旋糖酐)的能力。结果显示,siRNA转染效率较高,TLR9表达被显著下调。干扰TLR9后DC在CpG作用下,表面标志CD40和MHCII表达未被上调,但吞噬功能维持较强的水平,DC表现出未成熟状态。这些结果提示,我们建立的RNA干扰(RNA in-terference,RNAi)方法能够有效阻断TLR9的表达,为进一步研究CpG信号刺激对DC成熟和功能变化的影响提供了一种有效工具。; 马玲李晓曦徐祎欣赵叶琳赵晓寅孙凌云侯亚义; 关键词：树突状细胞 CPG

17-β雌二醇增强TLR9信号引起的B细胞活化: 目的:雌激素对免疫系统有多种调控作用,自身免疫性系统性红斑狼疮(SLE)多发于青年女性,其特征性症状为体内抗DNA抗体的明显增多。机体主要是通过TLR9识别DNA,而在SLE等自身免疫性疾病发表中起重要作用的B细胞上表达...; 徐祎欣李晓曦马玲侯亚义

人胚胎心脏来源间充质干细胞的获取及其生物学特征: 2008年; 背景：目前尚缺乏关于人胚胎心脏来源间充质干细胞各代在体外生物学特征的报道。目的：以不同培养方法获取人胚胎心脏来源的间充质干细胞，并观察其生物学特征，筛选适合作为心肌修复细胞源的传代次数。设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。材料：流产人胚胎10例，均来自南京大学医学院附属鼓楼医院，经产妇及家属知情同意，实验获得医学伦理委员会批准。方法：取心脏组织，剪为约1mm的碎块，胶原酶消化过筛。获得单细胞悬液采用细胞培养法，向细胞悬液中添加10％FBS的DMEM／F12培养基;消化后的残余组织采取组织块培养法，放于培养板中，于37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中放置1．5h后．添加10％FBS的DMEM/F12培养基。两种方法均采取直接贴壁方式获取贴壁细胞，常规传代。主要观察指标：倒置显微镜观察心脏组织来源各代细胞的形态特征：流式细胞仪检测各代细胞表面标志，分析细胞周期。结果：细胞培养与组织块培养至P3代后，细胞形态相似且均呈梭形。细胞培养的P3和P4代以及组织块培养的细胞群中CD29和CD44阳性比例较高．而c—Kit、CD31、CD45、GATA-4和c—Tnt均呈阴性：细胞培养的P2和P3代细胞群间充质干细胞的比例最大．组织块培养的细胞中P3代细胞群间充质干细胞的比例最大;且P2-P4代细胞状态较好．当传至P7代时细胞生长速度开始减慢。原代-P5代细胞绝大部分处于静息状态，但保留自我更生的潜能，符合干细胞特性。结论：利用细胞培养法或组织块培养法都可以成功获得人胚胎心脏来源间充质干细胞，P3代细胞更适合予心脏修复的细胞移植治疗。; 泥艳红凌丽珍胡娅莉蒋文群叶鸿苹黄亚红侯亚义; 关键词：间充质干细胞生物学特征细胞培养组织块培养

雌激素通过调节MSC分泌细胞因子影响其对DC成熟与功能的抑制被引量：5: 2010年; 目的:本研究试图检测不同浓度17β-雌二醇(E2)存在的情况下人胎肺间充质干细胞(MSC)增殖和表型的变化,并分析这种状态的MSC对树突状细胞(DC)成熟和功能影响及其可能的机制。方法:分离培养人胎肺MSC,加入不同浓度E2,在24小时后对MSC进行细胞计数、测定其增殖和贴壁能力,并用流式细胞仪分析MSC表面标志,RT-PCR测定MSC中细胞因子(IL-6、TGF-β和VEGF)mRNA的表达情况。进一步探讨了E2处理24小时后的MSC对DC成熟和功能的影响。结果:分离得到的MSC纯度达到95%以上;E2影响MSC的增殖和贴壁能力,但不影响MSC表面标记的表达;MSC与DC共培养后DC表面CD86、MHCⅡ和CD80的表达均有所降低,而当DC与经E2预处理过的MSC共培后,DC表面MHCⅡ、CD80和CD86的表达回升;高浓度E2作用MSC24小时后,MSC表达的TGF-β与对照组相比减少,而IL-6和VEGF与对照组相比增加。结论:E2可能通过调节MSC分泌细胞因子的水平,改变MSC对DC的免疫抑制作用。; 赵叶琳赵晓寅孙凌云侯亚义; 关键词：雌激素间充质干细胞树突状细胞

17β-estradiol协同CpG活化小鼠DC并上调其MCM6的表达: 目的:雌激素对免疫系统有多种调控作用,自身免疫性系统性红斑狼疮(SLE)多发于青年女性,其特征性症状为体内抗DNA抗体的明显增多。机体主要是通过TLR9识别DNA,而在SLE等自身免疫性疾病发表中起重要作用的B细胞上表达...; 徐祎欣李晓曦马玲侯亚义

人胎儿肝脏来源C-kit^＋细胞的特征被引量：1: 2009年; 背景:在成年动物肝脏中干细胞含量很少,且体外大量扩增并保持未分化状态的问题仍然没有很好的解决,许多科研者预测胚胎肝干细胞可能具有诱人的临床应用价值。近年来C-kit被选择作为研究肝干细胞的共同标志,并发现C-kit抗原参与肝干细胞的生长和发育。目的:对胎儿肝脏来源的C-kit+细胞进行分离培养,观察其体外生长和分化的特征。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2008-03在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。材料:肝脏C-kit+细胞来源于32例流产胎儿,由南京大学医学院附属鼓楼医院提供。Percoll分离液为Pharmacia公司产品,Ficoll分离液为天津灏阳生物制品科技有限责任公司产品,表皮生长因子、肝细胞生长因子为R&D公司产品。方法:无菌状态下取出胎儿肝脏,以胶原酶消化法和机械分离法获得胎儿肝脏来源单细胞悬液,分别采用1.070g/mLPercoll分离液和1.077g/mLFicoll分离液进行密度梯度离心,吸取界层细胞,添加含体积分数为0.1FBS、20μg/L肝细胞生长因子、40μg/L表皮生长因子的DMEM/F12新鲜培养基诱导9d。主要观察指标:胎儿肝脏中C-kit+细胞计数,界层细胞形态、生长特征、表型及C-kit标志的鉴定,界层细胞诱导分化结果。结果:未经分离的新鲜胎儿肝脏细胞中C-kit+细胞所占比例仅为1.28%,使用Percoll和Ficoll分离液获取的界层细胞分布在三角形区域内的C-kit+细胞所占比例显著增加,分别为74.21%和72.15%,但绝对数量仍然有限。两种分离液获取的界层细胞在形态、生长状况方面基本相似,免疫细胞化学染色鉴定后大体可分为4类:第1类细胞为C-kit+细胞集落,第2类细胞既呈CD29+、CD90+、CD34-、C-kit-(间充质干细胞表型特征),又较弱地表达细胞角蛋白19(胆管细胞特异性标志),第3类细胞较强地表达细胞角蛋白19,不表达C-kit抗原,第4类细胞高表达CD45,微弱表达C; 凌丽珍泥艳红胡娅莉侯亚义蒋文群叶鸿苹; 关键词：肝干细胞间充质干细胞胆管细胞

胎儿心脏来源细胞的分离培养及鉴定被引量：2: 2008年; 目的:胎儿心脏正处于组织器官形成和发育时期,其中的细胞数量和增殖能力应该高于成体组织,但是目前关于培养人胎儿心脏来源细胞的方法以及基本生物学特征还鲜见报道。实验拟建立体外培养胎儿心脏来源细胞的方法,探讨心脏来源细胞基本的生物学特征和细胞种类。方法:实验于2005-10/2007-05在南京大学医学院和国家生物医药技术重点实验室完成。①实验材料:水囊引产的12～18周胎儿10例由南京大学医学院附属鼓楼医院提供,实验经产妇及家属同意,并经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:取胎龄12～18周水囊引产的胎儿心脏,将消化后获得的细胞培养于添加内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子、心肌营养素及含10% FBS的DMEM/F12培养基中。③实验评估:应用显微镜观察细胞的形态特征,采用RT-PCR检测培养前后心脏来源细胞干细胞标志基因等基因的表达,流式细胞仪检测培养前及培养19d后细胞的表面标志。结果:①心脏来源的细胞可以生长增殖。培养16d后出现克隆,并有类似生长中心的区域形成,类似生长中心区域内的细胞较小,形态接近圆形,细胞核占细胞比例大,而周围的细胞形状多为梭形核多角形,细胞核所占的比例较小,并且显微镜下可见正在分裂的细胞。②RT-PCR检测显示,胎儿心脏组织分离获得的心肌细胞中表达c-Kit、KDR、GATA-4、Nkx-2.5、MEF-2c,不表达c-Tnl。培养19d后细胞中GATA-4、KDR、MEF-2c表达量降低,不表达c-Kit,Nkx-2.5和c-Tnl。③流式细胞仪检测发现培养19d后细胞群中CD29和CD44高表达,CD45、GATA-4和c-Tnt低表达。结论:建立了一种体外培养胎儿心脏来源细胞的方法,并确定细胞群中有心脏来源的间充质干细胞和心肌祖细胞。; 泥艳红凌丽珍胡娅莉侯亚义蒋文群叶鸿苹陈建秀黄亚红; 关键词：胎儿心肌干细胞间质细胞 C-KIT

Down-Regulation of TLR9 Expression Affects the Maturation and Function of Murine Bone Marrow-Derived Dendritic Cells Induced by CpG: 2009年; Toll-like receptor 9 （TLR9） is expressed intracellularly by dendritic cells （DCs） and specifically recognizes unmethylated CpG motif. Recognition of TLR9 to CpG DNA can induce DC maturation followed by the subsequent immune responses. Here, RNA interference （RNAi） was used to identify the effect of CpG DNA signaling on DC function. The results showed that transfection of DCs with siRNA specific for TLR9 gene significantly down-regulated TLR9 expression. Immature DCs transfected with TLR9 siRNA did not differentiate into mature DCs with exposure to CpG. TLR9 siRNA-treated DCs expressed low levels of MHC II and CD40 without reducing endocytosis. Furthermore, TLR9 siRNA-transfected DCs exhibited a decreased allostimulatory capacity in a lymphocyte proliferation assay and attenuated Thl responses by decreasing IL-12p70 production. Our findings indicate that siRNA in silencing TLR9 gene in DCs may offer a potential tool to study the TLR9-CpG pathway.; Ling MaGuangfeng ZhaoChunyan HuaXiaoxi LiXiaoyin ZhaoLingyun SunYayi Hou; 关键词：CPG

应用基因芯片检测系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞被引量：1: 2009年; 目的应用寡聚核苷酸基因表达芯片研究系统性红斑狼疮（SLE）患者与健康志愿者外周血B淋巴细胞基因表达谱的变化。方法应用包含21522条70mer长度Oligo DNA的寡聚核苷酸芯片（22K Human Genome Arrav）分别检测6例SLE患者和6名健康志愿者外周血B淋巴细胞基因表达谱，应用聚类分析法分析差异表达的基因。结果SLE患者外周血B淋巴细胞和健康志愿者B淋巴细胞之间基因表达谱有显著差异，芯片中聚类表达显著上调的基因15个，主要包括Ⅰ型干扰素（IFN）通路中的相关分子；聚类表达显著下调的基因22个，主要包括神经内分泌相关的精氨酸甲基化转移酶家族等与雌激素代谢相关的基因。进一步对这些差异表达基因进行了初步的功能分类分析，分析结果表明这些基因主要与B淋巴细胞的JAK—STAT信号通路和激素代谢相关。结论SLE患者外周血B淋巴细胞基因表达谱存在显著差异，芯片显示氨基酸代谢、激素代谢、细胞增殖和凋亡、炎症反应等相关生物学功能的改变可能参与SLE的发病。; 李晓曦孙凌云徐祎欣马铃侯亚义; 关键词：B淋巴细胞基因表达谱

RNA interference on TLR9 expression affects the response of bone marrow-derived murine dendritic cells to CpG: ＜正＞Toll-like receptors 9（TLR9） are expressed intracellularly by dendritic cells（DC） and specifically recognize...; Ma Ling~1,Li Xiao-Xi~1,Xu Yi-Xin~1,Zhao Ye-Lin~1,Zhao Xiao-Yin~1, Sun Ling-Yun~2,Hou Ya-Yi~(1**) (1.Immunology and Reproductive Biology Laboratory.Medical School,Nanjing University. Nanjing,210093,China; 关键词：CPG; 文献传递

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