国家重点基础研究发展计划(2010CB529400)
- 作品数：12 被引量：32H指数：4
- 相关作者：高青梅陆惠娜梁爱斌张文君万虹更多>>
- 相关机构：同济大学附属同济医院清华大学玉泉医院首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Wnt和Notch信号通路在肺癌干细胞调控中的研究进展被引量：5
- 2013年
- 肿瘤干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的少部分未分化细胞,在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。肺癌干细胞被认为是肺癌发生的根源,具有自我更新、分化、转移、致瘤性等特征。已有研究表明,肺癌干细胞受自身内在基因和其所处微环境信号的共同调控,两条经典的发育调控通路Wnt、Notch在其中发挥重要作用。深入研究Wnt和Notch信号通路在肺癌干细胞调控中的作用,有望在肺癌的诊断及治疗中找到新靶点。
- 况里杉罗虎周向东
- 关键词：肺癌干细胞WNT信号通路NOTCH信号通路
- SiRNA干扰技术观察HDAC3对胶质瘤细胞U87-MG的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探索组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）基因对胶质瘤细胞U87-MG增殖、凋亡、细胞周期以及迁移的作用。方法人胶质瘤细胞株U87-MG，应用siRNA干扰技术分别导入HDAC3干扰质粒和空载对照质粒，蛋白印迹实验（Wesiemblot）检测干扰效果，应用CCK．8增殖实验、成球实验、AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒、碘化丙啶染色方法、Transwell小室实验和划痕实验，分别检测HDAC3基因干扰后对胶质瘤细胞株增殖、凋亡、细胞周期和迁移等功能的影响。结果Westernblot结果显示，干扰后细胞株U87-MG中的HDAC3表达明显减弱；CCK-8增殖实验和成球实验，与对照组相比较，胶质瘤细胞株中干扰HDAC3后细胞增殖曲线明显下降，U87-MG对照组和U87．MGSi的14d成球总数目分别为23和7（P〈0．05）；细胞凋亡实验，U87-MG对照组和U87-MGSi的早期凋亡率分别为（1．40±0．29）％和（9．26±2．32）％（P=0．004）；周期实验，U87-MG对照组和U87-MGSi的G0／G1期百分率分别为80．34％和88．37％，（t检验，P〈0．05）；Transwell小室实验和划痕实验，胶质瘤细胞株U87-MG中干扰HDAC3后细胞迁移能力明显下降。结论HDAC3作为一种致癌基因，通过调控细胞G0／G1期参与胶质瘤细胞的增殖、凋亡和迁移。
- 朱晋万虹姜涛张庆琳薛超强钱程张玉琪
- 关键词：神经胶质瘤致癌基因
- Nanog转录因子的功能及其与神经系统肿瘤的关系
- 2013年
- Wang等于2003年运用PCR技术侦测鼠胚胎干细胞eDNA库，报道了一种包含自然杀伤基因家族同源结构域的基因（early embryo specificNK，ENK）。指出这种基因在胚胎干细胞中特异表达，但功能不明。
- 张庆琳万虹张玉琪
- 关键词：神经系统肿瘤NANOG转录因子基因家族PCR技术自然杀伤
- 慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株被引量：3
- 2011年
- 目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为探讨Wnt/β-catenin信号在鼻咽癌发生中的作用提供细胞模型。方法于β-catenin CTNNB1基因编码区选择3个siRNA靶点合成3对shRNA干扰序列,分别与pLKO.1载体连接,构建pLKO.1-sh-β-catenin质粒(干扰组1)、pLVTHM-sh-β-catenin(干扰组2)和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒(阴性对照组);将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集含慢病毒颗粒的上清液感染人鼻咽癌6-10B细胞,感染pLKO.1-sh-β-catenin和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒的细胞经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率及下游基因c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测比较细胞增殖状况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率。结果 Western blot检测结果显示pLKO.1-sh-β-catenin(干扰组1)干扰效率最佳,β-catenin及c-myc蛋白表达减少;MTT检测显示干扰β-catenin后细胞吸光度下降,细胞增殖受到抑制;穿过Transwell小室底膜的细胞数:干扰组1为(23.5±4.6)个,明显低于阴性对照组(50.3±5.3,P<0.01)及空白对照组(54.3±5.6,P<0.01)。结论成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为进一步研究以β-catenin为靶点的鼻咽癌基因治疗奠定基础。
- 姜睿张弓马磊李锡清肖广惠姚开泰
- 关键词：WNT/Β-CATENIN慢病毒载体RNAI鼻咽癌
- 2种CCK-8试剂最佳实验条件比较被引量：5
- 2012年
- 在细胞学实验中，MTT（噻唑蓝）比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点，而被广泛使用，但其操作较繁琐，需加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲腆颗粒，且往往因溶解不全而对实验结果造成影响，为克服MTT法的不足，近年来出现了另外一些检测试剂，如XTr试剂、MTS试剂，国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8（cellcountingkit-8），其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性，
- 梁伟高青梅张文君秦伟陆惠娜黄滨滨梁爱斌
- 关键词：CCK-8细胞活性试剂比较
- 利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究被引量：6
- 2012年
- 本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。
- 梁伟张文君高青梅陆惠娜黄滨滨修冰梁爱斌
- 关键词：淋巴瘤SIRNA基因沉默SURVIVIN
- 组蛋白去乙酰化酶3与小儿胶质瘤发病和预后的关系被引量：3
- 2014年
- 目的 探索组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）基因与小儿胶质瘤恶性分级以及预后的关系.方法 选取北京天坛医院2009年至2012年期间小儿神经外科病房收集的小儿胶质瘤标本（年龄≤15岁）70例,7例成人癫痫患者颞叶切除标本,Western blot以及RT-PCR方法检测HDAC3的蛋白表达和转录水平的表达,分析与胶质瘤病理分级的关系.相关分析检测HDAC3表达与患儿生存期的相关性.生存分析检测HDAC3表达与预后的关联性.结果 实验数据揭示在小儿胶质瘤患者中随着病理分级（WHO2007）的增加HDAC3表达也明显的增高（P＜0.05）,而在正常脑组织中几乎不表达.HDAC3表达与生存期呈负相关（P=0.046＜0.05,Pearson Correlation=-0.387）.增高的HDAC3表达与患儿差的预后相关联.结论 HDAC3基因表达水平与小儿胶质瘤的病理分级呈正相关,与患儿生存期负相关.
- 朱晋张玉琪万虹姜涛
- 关键词：神经胶质瘤致癌基因
- 几种值得深入研究的肿瘤相关干（祖）细胞
- 2011年
- 越来越多证据表明，肿瘤是一类多因素致病、多步骤发生、异质性演进的遗传性疾病，是特殊的“难愈性创伤”，并与慢性炎性过程密切相关。肿瘤还被认为属于分化异常性干细胞疾病[1]。不仅肿瘤的发生与干细胞（stem cells）和（或）祖细胞（progenitor cells）密切相关，
- 卞修武
- 关键词：细胞疾病肿瘤遗传性疾病慢性炎性难愈性异常性
- 人脑胶质瘤移植瘤中CD133＋细胞表型与微生态环境的关系被引量：4
- 2010年
- 目的 研究CD133＋细胞在肿瘤组织中的分布特征,探讨其与微生态环境的关系.方法 用CD133＋肿瘤球或转红色荧光蛋白（RFP）基因的胶质瘤干细胞SU-3行裸小鼠原位、右腋皮下和腹腔等异位接种,致瘤后取荷瘤鼠全脑及整个皮下移植瘤组织行HE染色以及CD133免疫组织化学和免疫荧光染色,分别在光镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察移植瘤的组织结构和CD133＋肿瘤细胞的分布特征.结果 在光镜下,原位接种的CD133＋肿瘤细胞的分布有一定规律性,从形态上可分为成簇、成对和单个分布;从部位上可分为肿瘤血管旁、血管内皮、正常组织中和脑室内.皮下接种的CD133＋肿瘤细胞成簇或散在分布于肌肉和脂肪组织中,还可见CD133免疫复合物分布于血管壁及其基质.在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下可见,有些肿瘤血管内皮、血管旁的细胞共表达CD133和RFP.结论 在荷瘤鼠体内成簇生长的CD133＋细胞实际上是类似体外生长的肿瘤干细胞（CSCs）球,而成对和单个生存的CD133＋细胞分别代表CSCs与微生态环境相关的对称和不对称分裂;沿血管分布的CD133＋细胞是依赖微生态环境生存的细胞,而远离血管或远离肿瘤组织、孤立于正常组织中的CD133＋细胞是播散的CSCs或神经干细胞,属不受微生态环境控制的细胞.
- 宋武超费喜峰董军张全斌兰青黄强
- 关键词：胶质瘤肿瘤干细胞CD133微生态环境
- 诱导多功能干细胞源性肝细胞治疗肝功能衰竭的研究进展被引量：2
- 2014年
- 肝细胞移植治疗多种原因造成的肝功能衰竭,在临床上已取得较好的疗效.诱导多功能干细胞（iPS）及其定向分化技术的进步,为获得大量、安全及具有生物学功能活性的肝细胞移植所需的种子细胞提供了一种新的方法.对iPS定向分化成肝细胞并应用于肝细胞移植治疗肝功能衰竭的研究进展进行综述.
- 肖磊李军根刘运来
- 关键词：诱导多功能干细胞胚胎干细胞肝功能衰竭肝细胞移植
