国家自然科学基金(30771944)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：刘晓艳方红陈鸿超蒋筱凌朱定仙更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CMV启动子调控的VEGF-shRNA表达载体的构建及有效干扰序列的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的:构建针对人VEGF基因的小干扰RNA(siRNA)的表达载体,实现CMV启动子调控,转染肿瘤细胞后观察其对VEGF基因的干扰作用,并筛选出有效的VEGF-shRNA。方法:设计三对VEGF靶向的发夹状shRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入质粒pDC311-SV40-RC中,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人骨肉瘤细胞U-2 OS,分别培养3d和7d后收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达。结果:将针对VEGF基因的siRNA的双链寡核苷酸片段成功克隆到pDC311-SV40-RC载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染U-2 OS细胞后,ELISA方法检测蛋白表达水平证实干扰序列3能有效降低VEGF的表达。结论:成功构建了CMV启动子调控的针对VEGF基因的siRNA载体,转染肿瘤细胞后可抑制VEGF的表达,并筛选出有效的干扰序列。
- 刘晓艳方红陈鸿超蒋筱凌
- 关键词：血管内皮生长因子A寡核苷酸类
- 溶瘤病毒介导RNA干扰治疗肿瘤的进展
- 2009年
- RNA干扰是一种由双链RNA介导的基因沉默现象，是目前简单而高效的阻断哺乳动物细胞内特异基因表达的最有效方法。溶瘤病毒是一类仅在肿瘤细胞内特异增殖的病毒载体，通过其介导的小干扰RNA不仅可以靶向肿瘤细胞，随着病毒在肿瘤细胞内的复制而加强RNA干扰介导的癌基因沉默效果。因此，溶瘤病毒介导的RNA干扰模式开辟肿瘤基因治疗的新途径。
- 刘晓艳方红
- 关键词：RNA干扰溶瘤病毒肿瘤
- 基于miR30骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体的构建及其效应研究
- 2013年
- 目的:模拟miR30的框架结构设计针对HPSE的shRNA,将其克隆至慢病毒载体的CMV启动子调控的表达框内,实现Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控。方法:设计3条基于miR30骨架的HPSE-shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化LV PP-GFP载体连接产生重组慢病毒载体LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒,感染A375细胞。以实时荧光定量PCR检测HPSE-mRNA的表达情况,以Westen blot检测HPSE蛋白的表达水平。结果:构建出以miR30为骨架的针对HPSE的慢病毒干扰载体,经阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确。实时荧光定量PCR和Westen blot结果表明,LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA重组病毒感染后A375细胞HPSE-mRNA和蛋白的表达明显降低。结论:本研究成功构建了以miR30为骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体,实现了Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控,为今后实现溶瘤病毒介导RNAi提供了实验依据。
- 刘晓艳方红朱定仙张妤
- 关键词：慢病毒属微RNAS转录启动子葡糖醛酸糖苷酶
