国家自然科学基金(30870542)
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
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- 大鼠皮肤的冷冻干燥保存被引量：7
- 2009年
- 背景:细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据。目的:用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成。材料:体质量150g左右成年SD大鼠。海藻糖由Sigma公司提供。方法:通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1000mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9h)和温度[4℃、4～37℃(相转变)和37℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件。将负载海藻糖的皮肤置于含100g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1℃/min的速率降温至-80℃后移入冷冻干燥机中进行冻干。将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照。以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植。主要观察指标:海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况。冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况。结果:海藻糖浓度小于800mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P<0.05),浓度大于800mmol/L,海藻糖载入量差异不显著。孵育温度为37℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4℃组(P<0.05),相转变组与37℃组差异无统计学意义。皮肤孵育4,7,9h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5h的载入量(P<0.05),孵育时间为4,7,9h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7h后皮肤的海藻糖载入量不再增加。实验以海藻糖浓度为800mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7h为优化的负载条件处理大鼠皮肤。冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状。水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别。冷冻
- 杨维姜曼耿文鑫严兴荣都慧聪魏菁刘亮岐赵洁李立文陈富林
- 关键词：皮肤海藻糖冷冻干燥自体移植
