国家自然科学基金(30950028)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：黄怡徐恒吴琼黄文涛廖柳凤更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究被引量：2
- 2014年
- 目的应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索该技术干预肝癌的可行性。方法制备4个针对人POLD1基因的shRNA表达质粒,转染SMMC-7721细胞48 h后,荧光定量PCR法检测POLD1基因的表达,CCK-8检测细胞生长情况。结果测序鉴定证实4个shRNA表达质粒构建成功,将其转染SMMC-7721细胞后,NEO-POLD1-1和NEO-POLD1-4表达质粒抑制效果明显,使SMMC-7721细胞的增殖受到抑制,并且使POLD1基因表达在mRNA水平抑制,NEO-POLD1-1相对表达量为(0.1425±0.0205),NEO-POLD1-4相对表达量为(0.209±0.009)。结论针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖,且实现RNA干扰具有序列选择性。
- 吴琼黄文涛黄怡廖柳凤谭晓红徐恒
- 关键词：肝肿瘤RNA干扰技术
- 反义RNA技术对抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因表达的研究被引量：5
- 2013年
- 目的:应用反义RNA技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达,探索采用该技术干预肝癌的可行性。方法:制备人POLD1基因的反义RNA表达质粒,同时建立空白对照组与阴性对照组,由此将实验分为阴性对照组(转染空载体的SMMC-7721细胞)、空白对照组(肝癌细胞SMMC-7721)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌SMMC-7721细胞)3组。MTT实验分析细胞增殖变化,并在转染SMMC-7721细胞48h后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测POLD1基因的表达。结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,转染了反义RNA的实验组细胞增殖受到明显抑制。在转染后24～72h,实验组吸光度24h为0.306 7±0.015 4,48h为0.459 2±0.033 2,72h为0.567 1±0.061 1,与空白和阴性对照组相比,P值均<0.05。实时荧光定量PCR实验显示,实验组POLD1的mRNA表达明显下调为0.142 5±0.020 5,阴性对照组为1.017±0.188,空白对照组为1.00±0.00(F=26.5,P<0.05),说明POLD1基因表达受抑制。蛋白质印迹实验显示,POLD1基因蛋白水平(p125)变化趋势与mRNA相同,均为下调,其中实验组为0.222 3±0.009 7,阴性对照组为0.237 9±0.005 9,空白对照组为0.235 4±0.003 4(F=1 365.754,P值均<0.05),说明反义RNA可抑制p125蛋白表达,结论与基因水平趋势一致。结论:针对POLD1基因设计的反义RNA体外抑制了肝癌细胞SMMC-7721的增殖,这与POLD1在基因和蛋白水平的表达下调有关。
- 吴琼黄文涛黄怡徐恒
- 关键词：肝肿瘤反义RNA基因表达
- 氯化两面针碱通过Rb/E2F途径抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用机制研究被引量：4
- 2013年
- 氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从芸香科植物两面针根部提取的一种天然生物碱,具有很好的抗肿瘤活性,在体外能抑制鼻咽癌,肺癌等细胞的增殖。研究表明NC可导致细胞周期G2/M期阻滞,并诱导细胞凋亡。E2F/RB在细胞周期调控中起重要作用,它们与CyclinD1、CDK4、CyclinE、CDK2构成复杂的反馈调控网路,调节细胞从G1期到S期的过渡,推动了细胞周期的转变。另外,研究表明E2F是重要的转录因子,参与了基因的转录调控。研究肝癌细胞SMMC-7721经两面针碱处理后RB/E2F通路的相关分子水平变化,以及氯化两面针碱在RB/E2F途径抑制肝癌细胞增殖,参与细胞凋亡作用的机制。应用CCK8方法测定NC对SMMC-7721细胞存活率的影响;Annexin-V和碘化丙碇(propidium i-odide,PI)双染法检测细胞凋亡和坏死情况;RT-PCR检测不同剂量NC对E2F、RB mRNA表达影响;WB检测E2F蛋白含量的变化。结果显示NC可抑制肝癌细胞增殖,降低细胞存活率,促进细胞凋亡,明显降低细胞中E2F、RB mRNA和E2F蛋白的表达,并呈浓度依赖性。NC通过作用于E2F/RB调控通路,抑制了E2F/RB的表达,参与了细胞的增殖抑制和诱导了细胞凋亡。
- 黄怡廖柳凤黄文涛吴琼何洁梅李敏徐恒
- 关键词：氯化两面针碱转录调控E2FRB肝癌
- 人肝癌SMMC-7721细胞中POLD1基因CDS突变的检测
- 2013年
- 目的检测人肝癌细胞株SMMC-7721中POLD1基因CDS的突变情况,以期从DNA复制最关键酶的编码基因POLD1的突变为干预细胞恶性增殖提供新的思路。方法设计人POLD1基因CDS特异性引物,以人肝癌细胞株SMMC-7721总RNA为模板进行RT-PCR扩增,将扩增产物纯化后加入"腺嘌呤"并与T载体连接,将连接产物进行测序,与数据库中的序列进行比对。结果成功扩增了人肝癌细胞中POLD1基因的CDS片段。SMMC-7721细胞中POLD1基因的CDS存在11个碱基替换,1个碱基缺失。结论人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的CDS发生了突变,进而导致其编码的氨基酸序列发生改变。
- 黄文涛吴琼李锦源黄怡徐恒
- 关键词：肝肿瘤突变
- POLD1基因反义RNA对人正常肝细胞和肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的分析POLD1基因的反义RNA对人肝癌细胞SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702增殖的影响,以探讨利用POLD1基因反义RNA干预治疗肝癌的可行性。方法构建人POLD1基因的反义RNA表达质粒;将实验分为阴性对照组(转染空质粒的肝癌细胞SMMC-7721和肝细胞HL-7702)、空白对照组(未转染质粒的肝癌细胞SMMC-7721和肝细胞HL-7702)和实验组(转染人POLD1基因反义RNA表达质粒的肝癌细胞SMMC-7721和肝细胞HL-7702);采用CCK-8法分析细胞增殖情况。结果在转染0 h、24 h、48 h、72 h后,3组间肝细胞HL-7702的450 nm处吸光度值(A450值)差异无统计学意义(P>0.05)。实验组肝癌细胞SMMC-7721在转染24 h、48 h、72 h后,A450值均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 POLD1基因的反义RNA可在对正常肝细胞生长无明显影响下抑制肝癌细胞的增殖。
- 吴琼黄怡谭晓虹徐恒
- 关键词：肝肿瘤反义RNA正常肝细胞细胞增殖
