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Cloning of CBF3 Gene from Arabidopsis thaliana and Construction of Plant Expression Vector被引量：3: 2011年; [Objective] The aim was to clone CBF3 gene from Arabidopsis thaliana and construct plant expression vector pCAMBIA1301-Rd29A-CBF3.[Method] CBF3 gene and stress-inducible promoter Rd29A were amplified from the genomic DNA of A.thaliana for the construction of plant expression vector.[Result] Sequencing results showed that the cloned CBF3 gene had 750 bp,and showed 100% identity with the sequence published on GenBank.The promoter Rd29A had 1 425 bp,and showed 100% identity with the sequence published on GenBank.[Conclusion] Based on the binary vector pCAMBIA1301,the plant expression vector pCAMBIA1301-Rd29A-CBF3 was constructed successfully,which could materially improve the salt resistance,drought-tolerance,cold resistance of plants.; 张春平束良佐张启军吕川根蔡小宁; 关键词：RD29A PROMOTER CLONE

具荧光活性的节旋藻藻蓝蛋白α亚基在大肠杆菌中的重组表达被引量：4: 2011年; 为探索节旋藻藻蓝蛋白的生物合成机理,以钝顶节旋藻(Arthrospira platensisFACHB314)基因组DNA为模板克隆了藻蓝蛋白α亚基基因cpcA、催化脱辅基蛋白与色基结合的裂合酶基因cpcE和cpcF,以及催化色基合成的铁氧蛋白氧化还原酶基因pcyA;以Synechocystissp.PCC6803基因组DNA为模板克隆了亚铁血红素氧化酶基因hox1。然后分别将cpcA、cpcE和cpcF基因构建到质粒pACYCDuet-1中,将hox1和pcyA基因构建到质粒pET-24a(+)中,用电击法将二者共同转化E.coliBL21(DE3),经诱导表达得到具有荧光活性的节旋藻藻蓝蛋白α亚基。在590 nm激发波长下,荧光发射峰为637.8 nm,证实了节旋藻自身的裂合酶CpcE和CpcF能够催化色基PCB与藻蓝蛋白脱辅基结合产生有荧光活性的藻蓝蛋白α亚基,为表达有荧光活性的藻蓝蛋白提供理论和实验基础。; 衣俊杰臧晓南张学成袁定阳赵炳然唐俐; 关键词：节旋藻大肠杆菌

双价抗虫转基因水稻的抗虫鉴定: 的]将双价抗虫基因(修饰后的Cry1A?,sbk和改良的CpTI,sck)导入栽培稻南粳45中,并对其进行分子和抗虫鉴定,明确其抗虫性能,为应用打下基础.; 李聪张启军宗寿余孙永华赖东刘少奎吕川根; 关键词：ORYZA SATIVA INSECT RESISTANCE

抗病虫转基因广亲和水稻新资源的创新: 通过转基因方式同时聚合多个抗性基因是解决水稻生产中持久抗性的一条有效途径。本研究将去选择标记的2个抗虫基因(sbk和sck)采用根癌农杆菌介导法转入兼具抗水稻条纹叶枯病的广亲合水稻品种Dular中。一系列的分子检测(PC...; 张启军李聪虞德容孙永华吕川根; 关键词：水稻抗虫条纹叶枯病转基因; 文献传递

聚球藻hox1基因的克隆和序列分析被引量：1: 2010年; 本实验应用降落PCR方法从聚球藻Synechococcus cedrorum中扩增出717bp的hox1基因全序列,并与从Gen-Bank下载13个蓝藻hox1基因序列比较,用MEGA4.0进行序列同源性分析及蛋白结构特性分析。结果表明,Synecho-coccus cedrorum的hox1基因与聚球藻Synechococcus PCC7942和钝顶节旋藻Arthrospira platensis的hox1基因序列同源性分别为99.9%和99.2%,氨基酸序列同源性分别为99.6%和97.9%。还用邻接法和最大简约法构建了系统树并进行了聚类分析。; 张茜臧晓南张学成赵炳然袁定阳唐俐; 关键词：聚球藻聚类分析

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本被引量：7: 2010年; 介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。; 朱玉君樊叶杨庄杰云; 关键词：非变性聚丙烯酰胺凝胶

不同温度下水稻胚乳AGPase各同工酶基因表达特征初步分析被引量：4: 2011年; 以特青和泰国香米为材料,利用人工气候箱设置高温(日平均温度33℃)和适温(日平均温度25℃)2个温度处理,结合实时荧光定量PCR技术分析比较了水稻淀粉合成关键酶腺嘌呤-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)7个同工酶基因AGPS1、AGPS2a、AGPS2b、AGPL1、AGPL2、AGPL3及AGPL4的表达特征。结果表明,AGPS2b、AGPL2、AGPL3等3个同工酶基因表达较强,可能是水稻胚乳中AGPase基因表达的主要形式,其中AGPL2相对表达量最高;AGPS2b、AGPL2、AGPL3在2个品种中的相对表达量均为适温处理高于高温处理,在特青胚乳中各时期2种温度处理下的相对表达量总体高于泰国香米中的相对表达量。; 袁定阳孙志忠谭炎宁段美娟; 关键词：水稻实时荧光定量PCR

水稻多逆境响应基因OsMsr13的克隆与功能分析: 2011年; 为了深入研究作物耐逆境胁迫的分子机制和发现新的水稻耐逆基因,采用Affymetrix基因芯片技术与水稻表达芯片(含51,279个转录本),分析了培矮64S不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平变化,筛选出一批耐多逆境候选功能基因。OsMsr13是其中一个受低温、高温与干旱诱导,在各生长发育时期与组织器官均显著上调的基因。根据序列生物信息学分析,OsMsr13含有7个外显子和6个内含子c,DNA全长序列为1603bp,完整的ORF为1317bp,编码一个含438个氨基酸残基的蛋白质;在OsMsr13启动子区域发现多个与逆境应答相关的顺式作用元件;数据库查找和蛋白质多序列的比对表明OsMsr13的预测蛋白属于钙调素结合蛋白家族。为了进一步研究OsMsr13基因的功能,通过RT-PCR方法扩增到包含OsMsr13完整ORF的cDNA克隆,构建了含有OsMsr13重组基因的过量表达载体pCAM-JIT-OsMsr13,并经农杆菌介导法将重组基因导入到水稻中。转OsMsr13株系苗期的抗逆性试验表明OsMsr13过量表达能显著地提高水稻的耐寒性,但在抗旱和耐高温方面,转基因植株和野生型9311没有观察到多大差别。; 杨细平赵洋王曼玲朱玉兴夏新界; 关键词：水稻逆境基因芯片基因转化

sbk和sck双价抗虫转基因水稻的育成和鉴定被引量：5: 2011年; 将包含2个抗虫基因sbk[修饰后的Cry1A(c)]和sck(修饰后的CpTI)的质粒载体pCDMARUBA-Hyg转入农杆菌EHA105中,感染南粳45的愈伤组织,得到再生植株。用sbk和sck基因的引物进行PCR分析,从97个再生植株中筛选出42个含有2个抗虫基因而没有潮霉素基因的阳性植株。通过Southern杂交发现,42个阳性植株中具有1～5个外源基因拷贝的分别有23、11、5、2和1个单株。用RT-PCR检测发现,4个单拷贝株衍生的28个T3代植株外源基因能正常表达。人工饲喂二化螟幼虫试验也表明,转基因植株的幼虫死亡率达94%～100%,抗虫能力比对照显著提高。筛选出3个农艺性状优良的株系。; 李聪张启军刘少奎赖东漆庆明吕川根; 关键词：水稻抗虫转基因育种

转sbk和sck基因提高水稻Dular的抗虫能力被引量：2: 2011年; 将抗病虫基因与广亲和基因聚合在一起可为两系杂交稻更广泛的应用奠定基础。本研究将去选择标记的包含2个抗虫基因(sbk和sck)的质粒载体(pCDMARUBA-Hyg)采用根癌农杆菌介导法转入兼抗水稻条纹叶枯病的广亲和水稻品种Dular中。通过常规PCR检测,获得18份不具有选择标记的转基因阳性植株,Southern杂交分析结果表明其中15份为单拷贝插入,对这15份单拷贝转基因植株进行RT-PCR分析,结果抗虫基因都能正常表达。人工接虫鉴定结果表明,转入抗虫基因显著提高了水稻品种Dular抗螟虫的能力;同时利用Dular本身的广亲和基因(S5n)标记和与抗条纹叶枯病基因(qSTV-11b和qSTV-11c)的连锁标记进行分子检测,其结果表明这15份单拷贝转基因植株都具有广亲和与抗条纹基因的特征带;与不同籼稻和粳稻配组杂种F1的结实率和条纹叶枯病在田间自然发病状况下的调查结果表明,这些单拷贝植株不但具有广亲和与抗水稻条纹叶枯病的能力,而且其抗螟虫能力显著提高。; 张启军李聪虞德容孙永华吕川根; 关键词：水稻抗虫条纹叶枯病转基因

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国家科技重大专项(2008ZX08001-004)

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