甘肃省科技厅科技支撑计划项目(0708NKCA081)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：张勇徐鹏常卫华胡俊杰赵兴绪更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学河南科技大学更多>>
- 发文基金：甘肃省农牧厅生物技术专项甘肃省科技厅科技支撑计划项目更多>>
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- 人α-防御素-3基因乳腺特异性表达载体的构建及在兔乳腺中的瞬时表达被引量：2
- 2010年
- 为探索人α-防御素-3(HNP-3)基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-S,将pEGFP-WAP-HNP-S与脂质体包裹后通过乳腺导管注射法转入妊娠母兔乳腺中,Westernblot和ELISA检测HNP-3融合基因在乳腺中表达和融合蛋白的表达水平,并用Ni亲和层析柱进行纯化。结果表明:分娩后初乳中即有分子质量为40kD的HNP-3融合蛋白表达,分娩后第4d达到高峰,表达量为265ng/mL。实验证明HNP-3融合基因在乳腺组织中能够特异性的表达。
- 张鹏张勇赵兴绪李银聚程相朝张春杰吴庭才
- 牛Cathelicidin B MAP-28基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 根据GenBank中公布的牛BMAP-28基因mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从牛骨髓总RNA中扩增出BMAP-28基因片段,将其克隆到pMD-18载体上,通过PCR、酶切和测序分析鉴定,获得重组克隆载体pMD18-T-BMAP28.以重组质粒为模板,扩增BMAP-28基因的去信号肽片段,转入原核表达载体PET28a,并转化到Rosetta宿主菌中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物.结果表明:重组克隆载体序列与已发表的BMAP-28基因序列有1个碱基差异,并导致氨基酸替换;经IPTG诱导后,含PET28a-BMAP28重组质粒的大肠杆菌能表达预计大小的融合蛋白,且表达的蛋白有抑菌活性.
- 徐鹏张勇常卫华吴海凤
- 关键词：CATHELICIDINS原核表达
- 奶牛Cathelicidins Bac5基因的克隆、表达及抑菌活性分析被引量：1
- 2012年
- 根据已发表的牛Bac5 mRNA序列设计1对特异性引物,进行RT-PCR扩增,将目的片段定向克隆到原核表达载体PET28a(+),构建原核重组表达质粒PET28a-Bac5,并转化大肠杆菌Rosetta,进行IPTG诱导和SDS-PAGE检测.结果表明:采用RT-PCR技术成功扩增出414bp去信号肽的Bac5基因片段,重组蛋白经ZPTG诱导和SDS-PAGE检测发现,在19ku附近有1条清晰蛋白条带,与理论预测值大小一致;对表达的Bac5重组蛋白(rBac5)处理后进行抑菌活性的初步鉴定结果表明,rBac5对大肠杆菌(CVCC1450)和金黄色葡萄球菌(CVCC545)2种标准菌株和乳房炎乳的3种常见分离菌株均有一定的抑菌活性.
- 杨利恒张勇徐鹏胡俊杰高昭辉薛慧文
- 关键词：奶牛原核表达抑菌活性
- 兰州地区奶牛临床型乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验被引量：1
- 2011年
- 从甘肃省兰州市2家奶牛场采集了44份患有临床型乳房炎奶牛的乳样,进行细菌分离鉴定及主要病原菌的药敏试验.结果表明：导致奶牛临床型乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共35株,占44.3%;牛链球菌20株,占25.3%;大肠杆菌11株,占13.9%,说明奶牛乳房炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌.药效试验表明,这些细菌对乙酰螺旋霉素、新霉素、强力霉素、氟哌酸和阿莫西林等药物均高度敏感,而对青霉素、链霉素和复方磺胺已产生耐药性.
- 马龙张勇常卫华徐鹏胡俊杰
- 关键词：奶牛临床型乳房炎病原菌药敏试验
