国家高技术研究发展计划(2011AA100607)
- 作品数：56 被引量：106H指数：5
- 相关作者：石德顺陆凤花刘庆友罗婵杨素芳更多>>
- 相关机构：广西大学西南大学广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 水牛卵母细胞成熟过程中激活蛋白激酶C对受精后原核形成的影响
- 2015年
- 为了研究成熟过程中激活蛋白激酶C(PKC)对水牛卵母细胞受精后原核形成的影响,试验采用水牛卵丘-卵母细胞复合体在不同成熟培养液(即添加PVA、FCS、PMA和PVA的基础成熟液或添加4α-PDD和PVA的基础成熟液)中成熟24 h后,将水牛卵母细胞随机分为5组进行体外受精。结果表明:20小时时检查原核的形成,PMA成熟培养处理的卵母细胞受精后的原核形成率为(66.7±2.3)%,与PVA和FCS阴性对照组[分别为(51.4±3.6)%、(46.8±5.1)%]相比差异不显著(P>0.05),但激活PKC后受精形成原核的卵母细胞数比添加4α-PDD的对照组高且差异显著(P<0.05)。说明在水牛卵母细胞成熟过程中激活PKC有利于提高两原核的形成率。
- 朱云干徐椿慧卞桂华
- 关键词：水牛卵母细胞体外成熟
- 乳腺特异性表达轮状病毒VP6基因的初步研究
- 引言/目的人A组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要原因之一。接种疫苗降低感染率是减少轮状病毒危害最有效的方法,轮状病毒疫苗被世界卫生组织列为优先发展疫苗。轮状病毒第6个基因编码的VP6蛋白在轮状病毒各血清组中具有共同的抗...
- 李志鹏张海航刘福航石德顺刘庆友
- 转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析被引量：1
- 2015年
- 【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析。【结果】电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1%。使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体p BCN-IFN-CMVEGFP-neo和p BCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的m RNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-2b基因的转录与翻译。【结论】建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(p BCN-IFN-CMV-EGFP-neo和p BCN-IFN-CMVEGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备。
- 罗婵屈春凤李辉雷钏周宇刘庆友蒋建荣石德顺
- 关键词：水牛人干扰素细胞株
- 薯类植物中的淀粉生物合成及关键酶被引量：5
- 2013年
- 薯类作物富含淀粉,是我国重要的粮食和食品加工原料,也是变性淀粉和生物质能源的优势原材料。淀粉包含直链淀粉和支链淀粉两种组分,生物合成是其唯一的来源。各类作物中淀粉生物合成由多种功能保守的关键酶类相互协调、共同作用来完成。根据其功能,这些酶分为ADP葡萄糖焦磷酸化酶、淀粉合成酶、淀粉分支酶、淀粉去分支酶等。本文综述了近年来这些关键酶在生物学功能及作用机制上的新进展,分析了淀粉合成过程中可能包含的新酶种类如淀粉磷酸化酶、D-酶等的功能,并总结了这些酶类在薯类作物直链淀粉和支链淀粉合成中的功能特点。这为开展薯类作物中淀粉合成酶的鉴别和功能研究,以及建立薯类淀粉结构与性质的关联性提供了重要的参考。
- 赵姗姗杨俊杨俊周文智
- 关键词：薯类作物淀粉酶类
- 水牛keap1基因的克隆与序列分析
- 引言/目的Keap1,即Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-1ike Ech-associated protein-1),是抗氧化信号通路Keap1-Nrf2-ARE通路中的关键因子之一。有研究认为,Keap1...
- 赵鑫阮子芸秦希玲邵齐明陆凤花石德顺
- 水牛asf1a基因克隆及高效敲除靶位点的筛选被引量：1
- 2019年
- 本研究旨在对水牛anti-silence factor 1a (asf1a)基因进行克隆并行生物信息学分析,并进一步筛选基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的高效敲除asf1a基因位点。根据NCBI公布的牛asf1a基因mRNA序列设计特异性引物,以水牛GV期卵母细胞RNA反转录后的cDNA作为模板,通过PCR技术克隆获得asf1a基因序列片段,利用生物信息学分析方法,对克隆得到的序列进行和相应翻译的蛋白质进行了分析。在克隆得到的水牛asf1a基因序列上筛选3个PAM位点,并根据PAM位点构建3个gRNA载体(g1、g2、g3)以及相应的RGS载体,将pcDNA3.1-h Cas9连同gRNA、RGS 3种质粒按照3∶1∶1比例共转293T细胞,筛选高效的CRISPR/Cas9敲除位点。试验以水牛GV期的卵母细胞RNA作为模板,通过RT-PCR技术克隆获得asf1a基因序列,并据测序结果设计靶向区域筛选高效asf1a基因敲除位点。结果发现,水牛asf1a基因CDS区全长615 bp,编码204个氨基酸;多重序列分析显示,水牛asf1a基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、猪、人、小鼠同源性分别达到了99%,98%,97%,96%,93%;蛋白质结构预测分析发现存在ASF1-hist-chap等结构,二级结构含有9个α螺旋、12个β折叠、14个T转角、14个无规则卷曲。系统进化树分析表明,水牛和黄牛亲缘性最接近。根据水牛asf1a设计的敲除载体转染293T和成纤维细胞后,细胞基因组进行T7E1酶切的结果表明,g1位点对水牛成纤维细胞敲除效率最高,达到93.82%,同时,sanger测序表明效率达17/20。本研究成功克隆了水牛asf1a基因和分析了其生物学信息,同时筛选出了asf1a的高效敲除位点,为研究水牛asf1a基因功能奠定基础。
- 刘晓华邓凯范威宏黄永军杜姗姗冯万有潘尔科卢嘉卡文冬梅陆凤花石德顺
- 关键词：水牛克隆
- 不同浓度防冻剂和投液氮温度对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响被引量：1
- 2011年
- 比较了3种不同浓度的甘油(1.4,1.0,0.7mol/L)和投液氮温度(-25℃、-30℃和-35℃)对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响。结果发现,最终投液氮温度为-25℃时,胚胎冻后存活率以1.4mol/L甘油组为最高,同1.0mol/L甘油组相比,差异显著(78.5%vs 64.5%,P<0.05);与0.7mol/L甘油组相比,差异极显著(78.5%vs53.5%,P<0.01)。以1.0mol/L的甘油冷冻,-30℃投液氮的效果优于-25℃的,它们之间冻后胚胎的孵化率差异显著(77.1%vs 64.5%,P<0.05)。用0.7mol/L甘油冷冻,投液氮温度以-30℃的为最好,冻后胚胎的孵化率(73.3%)极显著(P<0.01)高于-25℃的(53.5%)。用1.4mol/L甘油冷冻,以-25℃投液氮为最好,冻后胚胎的孵化率(78.5%)显著(P<0.05)高于-35℃的(65.7%)。结果表明,不同的甘油浓度和投液氮温度对牛体外受精胚胎的冷冻效果有显著的影响。
- 蒋建荣黄凤玲陆凤花石德顺卢克焕
- 关键词：牛体外受精胚胎甘油孵化率冷冻
- 甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生被引量：4
- 2012年
- [目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。
- 张玲许宏宣秦白富廖志华陈敏杨春贤傅玉凡张启堂
- 关键词：植株再生甘薯
- 水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定
- 本研究通过对水牛卵巢颗粒细胞进行分离培养，并对其增殖和凋亡情况进行测定，以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性，从而建立一种较为完善的水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系，为进一步研究水牛卵巢颗粒细胞在卵母细胞体外成熟中的作用机制...
- 高亚可陆凤花马帆陈施蓓乔树叶管晓梅石德顺
- 关键词：水牛胚胎学卵巢颗粒细胞体外培养
- Scriptaid联合5-Aza-CdR对水牛成纤维细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰的影响
- 2019年
- 旨在探讨Scriptaid和5-Aza-CdR共同处理水牛耳部成纤维细胞(buffalo adult fibroblasts,AFs)对细胞生长特性、DNA甲基化和组蛋白乙酰化的影响,为提高水牛体细胞重编程效率提供一定的理论基础。首先使用不同浓度的Scriptaid(0,0.05,0.10μmol/L)和5-Aza-CdR(0,0.02,0.10μmol/L)分别处理AFs,筛选出最佳处理浓度后联合处理AFs 24h。随后采用免疫荧光染色技术分析联合处理后细胞的DNA甲基化和组蛋白H3K18乙酰化变化情况,并使用实时荧光定量PCR(QPCR)技术对其甲基化和乙酰化相关基因的表达进行检测。结果发现,适宜浓度的Scriptaid(0.05μmol/L)和5-Aza-CdR(0.02μmol/L)对细胞正常的形态、生长无显著影响。与对照组相比,联合处理后AFs中DNA甲基化水平显著降低,而组蛋白H3K18位点的乙酰化水平显著上升(P<0.05)。QPCR分析结果显示,联合处理后AFs中的DNA甲基化相关基因Dnmt1、TET1和TET2的表达水平均出现下调,其中Dnmt1的表达水平显著低于对照组(P<0.05);组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC2的表达水平也出现下调,其中HDAC1下调显著(P<0.05);而组蛋白乙酰化转移酶CBP,P300和HAT1的表达水平出现上升,其中P300和HAT1的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,适宜浓度的Scriptaid(0.05μmol/L)和5-Aza-CdR(0.02μmol/L)联合处理AFs,对细胞形态和生长无显著影响,但可以有效降低细胞甲基化水平并提高组蛋白H3K18位点的乙酰化水平。
- 赵鑫俸云史鹏飞余庆邵齐明许洁范威宏文冬梅石德顺陆凤花
- 关键词：DNA甲基化组蛋白乙酰化5-AZA-CDR
