广州市科技计划项目(2012J4100009)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李孜朱郇悯汤娟娟黎银燕韦雪梅更多>>
- 相关机构：广州医科大学广州医学院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组TRAIL的纯化及其对非小细胞肺癌细胞株的杀伤活性
- 2013年
- 目的:表达、纯化重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的活性片段,并观察其对非小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。方法:利用已有的pGEx-4T-l/TRAIL重组质粒转化BL21/DE3菌;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽转移酶(GST)标签的TRAIL,用GST-BIND树脂亲和层析柱纯化;SDS-PAGE电泳分析纯化结果;蛋白质超滤除盐、浓缩TRAIL;Bradford法定量。形态学观察肺癌细胞;乳酸脱氢酶(LDH)释放法确定TRAIL对肺癌细胞的杀伤活性。结果:共获得8.6 mg纯化TRAIL,其对A549、SPC-Al、HLAMP、95D、PGCL3、95C、H460等7株细胞株的IC50值分别为(2.33±0.22)μg/mL、(50.0±17.0)、(872.0±241.0)、(427.0±12.0)、(328.0±28.0)、(270.0±33.0)、(178.0±8.0)ng/mL。结论:相同组织类型的不同肺癌细胞株对重组TRAIL的敏感度不同,从低到高依次为A549、HLAMP、95D、PGCL3、95C、H460和SPCA1。
- 王飞朱郇悯韦雪梅刘嘉熙汤娟娟王嘉雯黎银燕陈晓湘李孜
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肺癌药物敏感度
- 组织型转谷氨酰胺酶与人非小细胞肺癌细胞侵袭力的关系及其机制
- 2013年
- 目的:研究组织型转谷氨酰胺酶(tTG)表达与人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549和PAα侵袭力的关系,及其与表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)等肿瘤侵袭相关基因之间的关系。方法:Transwell法检测细胞株A549和PAα的侵袭力;RT-PCR法、Real-Time PCR法及Western blot检测A549和PAα细胞株中tTG、EGFR和MMP-2的转录和表达水平,观察使用tTG或EGFR抑制剂后PAα细胞中tTG、EGFR、p-EGFR和MMP-2的表达水平变化。结果:PAα细胞株的侵袭能力为A549的165.3倍(P<0.05)。PAα细胞株的tTG、EGFR转录水平为A549细胞株的650.68(P<0.05)和34.4(P<0.001)倍。PAα细胞株的tTG、p-EGFR表达水平高于A549细胞株,MMP-2的转录水平在A549和PAα细胞株之间的差异没有统计学意义(P>0.1),但PAα的MMP-2表达水平高于A549。结论:PAα相对于A549具有高的侵袭力;其机制可能与EGFR的高表达和磷酸化、tTG和MMP-2的高表达有关;tTG可调控MMP-2的水平但它本身不受EGFR信号通路的调控。
- 朱郇悯汤娟娟黎银燕刘嘉熙韦雪梅王飞陈晓湘张雪雁李孜
- 关键词：组织型转谷氨酰胺酶侵袭力表皮生长因子受体
- 日本血吸虫感染小鼠肝脏Toll样受体2和6的表达变化被引量：4
- 2014年
- 目的探讨日本血吸虫感染小鼠肝内Toll样受体1(Toll-like receptor 1,TLR1)、TLR2和TLR6的表达变化。方法 50只BALB/c小鼠经腹部皮肤贴片法感染日本血吸虫尾蚴(20±3)条,分别于感染后5、6、8和12周各剖杀10只,收集小鼠肝脏。另10只鼠感染后6周经灌胃法给予吡喹酮治疗[250μg/(g·d)×3 d],于感染后8周剖杀收集小鼠肝脏。同时设未感染吡喹酮治疗组和健康对照组,每组10只小鼠。以肝脏总RNA为模板逆转录PCR检测感染不同时期TLR1、TLR2、TLR6的mRNA水平。应用免疫组化法检测各时期小鼠肝TLR2和TLR6的蛋白水平。结果感染后5、6、8、12周,小鼠肝组织中的TLR1、TLR2、TLR6 mRNA转录水平均升高。感染后6周,吡喹酮治疗组肝组织中的TLR2、TLR6 mRNA水平较单纯感染组下降,而TLR1未见明显变化。免疫组织化学结果显示,感染后5、6、8、12周,小鼠肝组织中的TLR2、TLR6蛋白表达水平升高;感染后6周,吡喹酮治疗组肝组织中的TLR2蛋白水平较单纯感染组明显下降,TLR2阳性表达面积百分比分别为(8.8±3.1)%、(44.2±4.3)%,差异有统计学意义(P<0.01)。感染后6周,吡喹酮治疗组肝组织中的TLR6蛋白水平较单纯感染组略微下降,TLR6阳性表达面积百分比分别为(37.4±3.5)%、(48.4±5.4)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠感染日本血吸虫后肝组织中的TRL2、TLR6蛋白水平升高,但TLR6的作用比TLR2弱。
- 汤娟娟季小芳朱郇悯黄华逸李孜
- 关键词：日本血吸虫小鼠肝脏TOLL样受体
- 日本血吸虫组织蛋白酶L样基因的原核表达、纯化与活性分析
- 2015年
- 目的：在原核系统中表达日本血吸虫组织蛋白酶L样（Schistosoma japonicum cathepsin L， SjCLs）基因，并检测所表达SjCLs重组蛋白的生物学活性。方法将SjCLs基因克隆入原核表达载体pET-30a （＋），并转化大肠埃希菌 BL21（DE3），用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thio-galactoside，IPTG）诱导重组蛋白表达，用亲和层析柱纯化表达产物，对表达的重组蛋白及纯化产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，采用蛋白印迹（Western blot）分析日本血吸虫感染兔血清与SjCLs 重组蛋白之间免疫反应性。以N-苄酯基-苯丙氨酸-精氨酸7-酰胺基-4-甲基香豆素（Z-Phe-Arg-Nmec）为底物，采用荧光分光光度计分析重组蛋白的酶活性。结果成功构建pET30a-SjCLs重组质粒，并在大肠埃希菌中表达获得SjCLs重组融合蛋白，SDS-PAGE显示，表达及纯化蛋白的相对分子质量约为38000，与SjCLs的理论相对分子质量基本一致。SjCLs重组蛋白的免疫反应性分析结果为阴性，表明重组蛋白不能被抗日本血吸虫感染兔血清识别。以Z-Phe-Arg-Nmec为反应底物，检测到SjCLs的吸光度（A460）值为925，证实SjCLs具有组织蛋白酶的活性。结论获得了原核表达的SjCLs重组蛋白，该重组蛋白具有类似于SjCL2的酶活性，为深入研究SjCLs的功能奠定了基础。
- 陈奕慧李孜
- 关键词：日本血吸虫组织蛋白酶原核表达重组蛋白
