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广州市医药卫生科技项目(2008-YB-052)
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相关作者:
黎健伟
吴涛
裴国献
江汕
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2009
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不同浓度5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记山羊骨髓基质干细胞的体外研究
2009年
目的利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记山羊骨髓基质干细胞(BMSCs),检测其最佳标记浓度、时间及细胞毒性,探讨其作为山羊BMSCs标记及示踪方法的可行性。方法抽取10个月龄健康中国青山羊骨髓,贴壁培养并鉴定。以浓度分别为5、10、15和20μmol/L的BrdU标记第4代细胞,分别记为A、B、C、D组;未用BrdU标记的细胞作为空白对照组(E组)。分别标记12、24、48和72h后,免疫荧光法检测各组标记阳性率,锥虫蓝拒染法检测标记后细胞存活率。结果原代及传代培养的山羊BMSCs形态主要为梭形,经诱导后能向成骨细胞和软骨细胞分化。标记后,荧光显微镜下胞核呈绿色荧光。随着标记时间和浓度的增加,各实验组标记阳性率逐渐增高,于15μmlol/L孵育48h后,其标记率可达到(93.32±3.25)%,与15μmol/L孵育72h和20μmol/L孵育48、72h差异无统计学意义(P〉0.05),与其他各组各时间点差异有统计学意义(P〈0.05);各时间点空白对照组标记阳性率均为0。锥虫蓝拒染实验示各组细胞存活率均在90%以上,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论BrdU浓度为15μmol/L,标记时间为48h时,对山羊BMSCs可得到最佳的标记效果,且安全性较高。
张晓强
李旭
金丹
黎健伟
吴涛
江汕
裴国献
关键词:
山羊
5-溴脱氧尿嘧啶核苷
干细胞
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