国家科技支撑计划(2007BAD51B03)
- 作品数：7 被引量：36H指数：4
- 相关作者：李学伟李明洲刘海峰朱砺张煦更多>>
- 相关机构：四川农业大学学研究院国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪Cystatin B基因cDNA克隆及遗传多态性分析被引量：8
- 2008年
- 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-半胱氨酸蛋白酶抑制素B(Cystatin B,CSTB)基因对肌肉宰后嫩化的作用,为研究嫩度性状的遗传机理提供理论基础。【方法】采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆到猪CSTB基因cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。采用PCR-RFLP方法,分析了84头猪CSTB基因多态性及其与嫩度性状的关联性。【结果】CSTB基因开放阅读框全长294bp,编码98个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CSTB基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为81%、85%和89%,推测氨基酸序列同源性为83%、76%和85%。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白与人、鼠Cystatin B类似,具有stefin类蛋白酶抑制剂的典型空间结构,包括5条平行的β-sheet和负责与被抑制酶结合的楔形边缘。在CSTB基因第二内含子内PvuⅡ酶切位点检测到了AA、AB和BB这3种基因型,关联性分析表明AA基因型个体的各项嫩度指标均极显著低于另2种基因型的个体(P<0.01),最大剪切力为5.11kg,硬度值为19.31kg·s、平均剪切力为3.26kg。【结论】CSTB基因在不同物种间具有较高同源性,猪CSTB基因多态性与猪肉嫩度性状显著相关。
- 陈磊李学伟朱砺李强李明洲
- 关键词：CYSTATINB基因基因克隆嫩度
- 猪CTSB基因和CSTB基因mRNA表达的发育性变化
- ＜正＞引言Cathepsin B（组织蛋白酶B,简称CTSB）是体内重要的内源蛋白酶,而Cystatin B（胱抑素B,简称CSTB）是一种最重要的胞内组织蛋白酶抑制剂。自2002年Russo等提出将CTSB和CSTB作...
- 陈磊王金勇李学伟
- 关键词：表达量
- 文献传递
- 长白猪和太湖猪不同生长阶段脂肪中肉质和胴体性状相关基因的表达谱分析被引量：4
- 2008年
- 动物个体的皮下脂肪厚度(subcutaneous fat thickness,SFT)和肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量取决于活体内脂肪酸合成与氧化竞争的动态平衡点.利用包含140个与猪脂肪沉积、代谢和肌肉生长密切相关基因的Oligo功能分类基因芯片检测了脂肪型的太湖猪和瘦肉型的长白猪在1,2,3,4和5月龄间背部皮下脂肪中这些基因的动态表达变化,发现长白猪有25个基因在月龄间的表达差异达显著水平(P<0.05),且包含23个基因的"参与脂肪或类固醇代谢的酶和调节蛋白"基因分组在品种间具有极显著意义(P<0.01).提示两猪种脂肪沉积能力的巨大表型差异可能与这些基因的差异表达规律密切相关.STEM聚类分析显示长白猪和太湖猪各有两个表达模式分别具有极显著(P<0.01)和显著性意义(P<0.05),但太湖猪基因表达谱比较分散,占主导优势的表达模式没有长白猪明显.提示太湖猪脂肪细胞内参与相关代谢活动的基因间的调控关系较长白猪复杂.基于动态贝叶斯模型构建的基因调控网络从一定程度上反映了两猪种在脂肪沉积代谢相关生理生化活动方面存在的明显差异,可从中挖掘相关性状潜在的关键特征基因.此外,对5个差异表达基因的荧光定量RT-PCR验证显示两种实验方法结果的相关系数平均高达0.874±0.071.以上结果筛选出了对于猪脂肪相关性状可能具有重要影响并值得深入研究的一些基因,初步揭示了生长发育过程中脂肪细胞基因表达调控的分子互作机制.
- 李明洲朱砺李学伟帅素容滕晓坤肖华胜李强陈磊郭玉姣王金勇
- 关键词：脂肪基因差异表达
- 猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异被引量：2
- 2009年
- 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0～5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。
- 陈磊王金勇李学伟刘良
- 关键词：表达量嫩度
- 雌性藏猪不同生长发育阶段肌肉生长和脂肪沉积相关基因的表达模式被引量：7
- 2008年
- 本研究利用包含140个与猪肌肉生长和脂肪沉积密切相关基因的Oligo功能分类基因芯片检测了藏猪在2、4、6和8月龄间背最长肌中这些基因的表达量变化,并在2月龄时与脂肪型的太湖猪和瘦肉型的长白猪进行比较。ANOVA分析结果表明:2-8月龄间藏猪分别有10和7个基因的表达差异达极显著(P<0.01)和显著水平(P<0.05);2月龄时藏猪体重极显著低于长白猪(P<0.01)和显著低于太湖猪(P<0.05),而藏猪肌纤维面积却为最大,但品种间差异未达显著水平(P>0.05);2月龄时3个品种间分别有15和13个基因的表达差异达极显著(P<0.01)和显著水平(P<0.05)。STEM聚类分析结果表明:直线下降和上升是藏猪在2-8月龄间最具代表性的基因表达模式(P<0.01)。另外,5个差异表达基因的荧光定量RT-PCR验证结果与基因芯片结果的Person相关系数平均高达0.856±0.109。提示:藏猪在2-8月龄间骨骼肌生长发育强度较肌内脂肪合成沉积占优势,2月龄时藏猪脂肪酸合成相关基因的表达水平较其他两品种低,而脂肪酸β氧化和肌纤维生长相关基因的表达水平较高,与其在高原独特的自然生态环境和全放牧散养的饲喂方式下长期形成的品种特性相符。
- 李明洲李学伟帅素容朱砺刘海峰王金勇蒋忠荣滕晓坤
- 关键词：藏猪肌内脂肪
- 应用抑制消减杂交技术筛选猪前脂肪细胞诱导分化前后的差异表达基因
- 引言前脂肪细胞(Preadipocytes)是脂肪细胞的一种,由多能干细胞或胚胎干细胞分化而来,胞浆内不含脂滴但具有聚脂的潜力,经诱导后能在胞浆内聚积脂滴而分化为成熟的脂肪细胞。目前,对前脂肪细胞诱导分化过
- 刘海峰李学伟朱蛎帅素容
- 关键词：前脂肪细胞抑制消减杂交差异表达基因
- 文献传递
- 猪脂肪前体细胞的原代培养及诱导分化被引量：9
- 2009年
- 以2日龄仔猪皮下脂肪组织为材料，采用胶原酶消化法分离培养出细胞成分均一、增殖旺盛的原代脂肪前体细胞。对所获细胞采用含50nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋0．25mmol／L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤＋100nmol／L罗格列酮的分化培养液进行诱导分化培养，少量细胞第2d开始出现脂滴，大多细胞第3d出现脂滴，分化率达95％以上，第4～7d小脂滴逐步融合为大脂滴。在脂滴出现及汇聚快慢上本实验所采用诱导方法明显快于其他诱导方式。
- 刘海峰王翔李学伟张利娟张煦
- 关键词：细胞培养诱导分化罗格列酮
- 罗格列酮对猪脂肪前体细胞分化过程中聚脂相关基因表达模式的影响被引量：7
- 2009年
- 为了解罗格列酮对猪脂肪前体细胞诱导分化过程的影响,利用胶原酶消化法分离猪皮下脂肪前体细胞,采用含50nmol/L胰岛素、100nmol/L地塞米松及0.25mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的分化培养液Ⅰ(对照组)和在分化培养液Ⅰ中添加100nmol/L罗格列酮的分化培养液Ⅱ(实验组)两种诱导分化方法对脂肪前体细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因的表达。结果显示:罗格列酮对PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT基因的表达有显著的上调作用,而对PPARα有一定的下调作用。试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于48h、48h、48h、108h、60h和24h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的1.7、48、3.3、487.5、5.8和3.6倍,GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到显著相关(P<0.05);而对照组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于84h、96h、48h、96h、36h和36h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的2.1、11、1.6、216.5、3.5和2.8倍,GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到极显著相关(P<0.01)。本实验结果表明:罗格列酮不仅可以极大的促进PPARγ和C/EBPα基因的表达,还能让其协同达到表达高峰;PPARγ和C/EBPα可能是调控猪脂肪前体细胞分化的关键转录因子;在脂肪形成过程中,甘油脂类的生物合成可能发生较早,同时PPARα可能主要参与甘油脂类生物合成的调控。
- 刘海峰张煦李明洲李学伟
- 关键词：罗格列酮基因表达
- 血清对猪前脂肪细胞分化过程中聚脂相关基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 为了探讨血清对猪前脂肪细胞诱导分化的影响,筛选更优的诱导方法。采用胶原酶消化法分离猪皮下前脂肪细胞,用含50 nmol.L-1胰岛素、100 nmol.L-1地塞米松、0.25 mmol.L-13-异丁基-1-甲基黄嘌呤、100nmol.L-1罗格列酮及添加(对照组)或不添加(试验组)10%FBS的分化培养液1和2对前脂肪细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因PPARα、C/EBPα、FASN、ACOX1、GPAT和ENPP2的表达模式。结果显示:血清对PPARγ和FABP4两基因的表达有极显著的上调作用(P<0.01),而对其他6个基因的表达有极显著的下调作用(P<0.01)。试验组中FASN、GPAT和ACOX1 3个基因诱导分化各时间点的综合表达量均极显著高于对照组(P<0.01),3基因表达量变化趋势间均达到极显著相关(P<0.01)。试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX1 4个基因的基因表达量变化趋势间均达到显著或极显著正相关。研究表明:前脂肪细胞分化过程中,细胞内脂肪酸的生物合成和β氧化均在发生,细胞内脂肪含量积聚的快慢取决于2个途径力量的对比;PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX1 4个基因间存在极强的协同表达现象;在细胞内脂肪积聚快慢上,含血清的分化培养液1要优于不含血清的分化培养液2。
- 刘海峰李学伟王滔张煦帅素容李明洲
- 关键词：血清前脂肪细胞基因表达实时定量PCR
