广东省科技计划工业攻关项目(2008A030201022)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：练玉银王家骥温志锋聂湘辉吴晓亮更多>>
- 相关机构：广州医学院广州医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早孕因子分离纯化方法的优化被引量：2
- 2012年
- 目的对正常早孕妇女血清中早孕因子(EPF)的分离纯化过程进行优化,以提高EPF的回收率。方法依次采用DEAEFast Flow离子交换色谱和Heparin Fast Flow亲和色谱,从妊娠12周内的正常早孕妇女混合血清中提纯EPF,采用活性玫瑰花结抑制试验(Ea-RIT)检测各阶段产物的EPF活性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳鉴定纯化物并测定其相对分子质量,用Western blot鉴定其特异性。结果经Ea-RIT检测后,DEAE Fast Flow离子交换色谱所现2峰中DE-Ⅰ峰为EPF活性峰,HeparinFast Flow亲和色谱所现2峰中H-Ⅱ峰为EPF活性峰。H-Ⅱ峰收集液经SDS-PAGE电泳,结果显示为1条相对分子质量为38 100的蛋白带,Western blot分析表明抗体与抗原匹配性良好。经检测其蛋白含量为0.615 mg,回收率为0.034%,与传统分离纯化四步法的回收率相比明显提高。结论本优化方法对于提纯孕血清中的EPF是可行的,大大提高了纯化效率。
- 温志锋练玉银王家骥聂湘辉林燕棉
- 关键词：早孕因子分离纯化
- EPF单抗联合顺铂对家畜膀胱肿瘤抑瘤效果的影响——基于膀胱肿瘤裸鼠移植瘤模型
- 2020年
- 为观察早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)联合顺铂(DDP)对膀胱癌细胞EJ裸鼠移植瘤的抑制作用,常规将EJ细胞接种于裸鼠右侧背部皮下,待肿瘤长至直径约5 mm时随机分为4组,每组5只,即空白对照组、顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组。定期测量裸鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。给药2周后处死裸鼠,剥取肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察细胞病理学改变;免疫印迹法检测早孕因子(EPF)的表达情况。结果表明,顺铂组、低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠移植瘤生长速度均慢于空白对照组。与顺铂组比较,低剂量单抗联合组和高剂量单抗联合组裸鼠末次给药的移植瘤体积分别为(131.05±8.26)和(97.92±7.35)mm^3。低剂量单抗联合组抑瘤率(35.78%)和高剂量单抗联合组抑瘤率(53.04%)均高于顺铂组抑瘤率(22.36%),差异均达显著水平(P<0.05)。与空白对照组比较,单抗联合组裸鼠EPF蛋白的表达量下降(P<0.05)。表明EPF-McAb联合顺铂可抑制膀胱癌细胞EJ在裸鼠体内增殖,其机制可能通过抑制EPF的表达发挥作用。
- 钟永怡周泉苏立杰练玉银王家骥陈骁熠
- 关键词：顺铂膀胱肿瘤家畜
- 鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的制备鼠抗早孕因子(EPF)单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。
- 练玉银吴晓亮王家骥温志锋聂湘辉
- 关键词：早孕因子单克隆抗体
- 早孕因子的研究进展被引量：1
- 2010年
- 早孕因子(Early pregnancy factor,EPF)是一种具有免疫抑制和生长因子特性的分泌性蛋白质,在受精后的孕血清及某些恶性肿瘤患者血清中均能检测到。EPF与伴侣素10(Chaperonin 10,Cpn10)是同源的。EPF首先通过玫瑰花结抑制试验在哺乳动物的孕血清中被发现。EPF单克隆抗体在妊娠诊断、肿瘤诊断和治疗等方面均有广阔的应用潜力。本文就EPF的来源、化学结构和生化特性、分离纯化及检测、作用及应用等研究进展作一综述。
- 吴晓亮练玉银王家骥
- 关键词：早孕因子
