国家自然科学基金(31101903)
- 作品数：12 被引量：26H指数：3
- 相关作者：邱丽华杨其彬赵超江世贵周发林更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省海洋渔业科技推广专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 斑节对虾CDK2基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：12
- 2015年
- 该研究以斑节对虾(Penaeus monodon)c DNA文库中的CDK2片段为基础,利用RACE技术获得Pm CDK2的c DNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。Pm CDK2基因全长1 679 bp,包括编码306个氨基酸的921 bp的开放阅读框(ORF),258 bp的5'UTR和500 bp的3'UTR。同源性分析显示,Pm CDK2与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)等物种的CDK2具有较高的同源性。使用荧光定量PCR技术研究了Pm CDK2的mRNA在不同组织和卵巢发育各时期的相对表达量和变化模式,结果显示,Pm CDK2在斑节对虾的脑、心、淋巴、肝胰腺、性腺等组织中均有表达,其中精巢中表达量显著高于其他组织;卵巢发育阶段表达分析则显示Pm CDK2在Ⅲ期表达量最高,其次是Ⅳ期。通过原核表达技术成功获得了含有6个His标签的融合蛋白,并对融合蛋白进行Western Blot试验,初步探讨了重组蛋白表达情况。结果表明,Pm CDK2基因在斑节对虾卵巢发育过程中可能发挥了重要作用,该结果对进一步探究斑节对虾卵巢发育机理提供了一定的理论依据。
- 戴文婷傅明骏赵超周发林杨其彬王艳史进选邱丽华
- 关键词：斑节对虾CDK2实时荧光定量PCR原核表达卵巢发育
- 斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织石蜡切片自发荧光的研究
- 2015年
- [目的]利用卵巢组织石蜡切片自发荧光观察斑节对虾卵母细胞发育。[方法]研究采用普通石蜡切片技术获得斑节对虾发育各期卵巢组织切片,采用苏木青/伊红染色后利用3种自发荧光对卵巢组织切片进行观察,探讨绿色自发荧光下观察卵母细胞不同发育阶段需要的最适曝光时间。[结果]卵巢组织切片直接自发荧光观察卵母细胞的发育较HE染色后观察更为方便、有效,且切片可以继续用于后续试验。3种自发荧光中,绿色自发荧光的观察效果最好。[结论]该研究可为快速观察斑节对虾卵母细胞发育和高效利用试验材料提供了新思路和新方法。
- 郭松赵超傅明骏江世贵杨其彬邱丽华
- 关键词：斑节对虾卵母细胞发育组织切片自发荧光
- 斑节对虾Relish基因的克隆及免疫刺激对其mRNA表达水平的影响被引量：1
- 2013年
- relish是Rel/NF-κB家族的重要成员之一。本研究在构建的斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组文库中克隆得到PmRelish基因,其全长5 112 bp,包括3 561 bp的ORF,推测编码1个含1 186个氨基酸的蛋白。PmRelish的蛋白具有Rel/NF-κB蛋白家族的典型结构特征,包括N端的RHD结构域,核定位信号,C端的6个锚蛋白重复序列以及死亡结构域,表明该蛋白是NF-κB1亚型。该基因在所检测组织中呈组成型表达,并在血细胞表达量最高。使用定量PCR检测PmRelish基因在不同免疫刺激条件下在肝胰腺中的mRNA表达情况,结果显示,肝胰腺PmRelish基因是诱导型表达,并被创伤弧菌、金黄色葡萄球菌和白斑综合征病毒(WSSV)调控表达,其中被创伤弧菌上调表达最显著。进一步证明了病毒核酸类似物Poly(I:C)、R484可激活PmRelish的表达。上述研究结果说明Relish是斑节对虾的重要免疫因子,可能通过直接或间接作用参与对细菌和病毒的免疫反应。
- 刘文静杨丽诗李晓兰邱丽华苏天凤杨其彬江世贵
- 关键词：斑节对虾WSSV
- 斑节对虾cyclinH基因的原核表达和蛋白纯化被引量：1
- 2015年
- cyclin H是细胞分裂周期调控中的重要因子,研究斑节对虾cyclin H对阐明斑节对虾卵巢发育机制有重要意义。构建了斑节对虾cyclin H的重组表达质粒p ET21a/cyclin H,利用原核表达技术进行诱导表达获得目的蛋白,并用亲和层析技术进行纯化,用SDS-PAGE、Western blot和质谱联用分析诱导和纯化结果。结果表明,斑节对虾cyclin H重组蛋白获得了表达,纯化的蛋白经鉴定为cyclin H重组蛋白;在22℃和37℃培养条件下,重组蛋白在LA和YTGA两种培养基上均能被诱导表达;22℃条件下,部分融合蛋白为可溶性表达;在37℃培养条件下LA培养基获得较好的效果,且均以包涵体形式存在。
- 郭松傅明骏赵超江世贵杨其彬彭超李伟杰邱丽华
- 关键词：斑节对虾原核表达
- 斑节对虾GRP94基因的克隆及其在不同应激条件下的表达与分析被引量：5
- 2016年
- 以斑节对虾(Penaeus monodon)为研究对象,利用RACE技术克隆得到了斑节对虾Pm GRP94基因c DNA全长,并对其结构进行生物信息学分析。Pm GRP94全长2 990 bp,包括75 bp的5'UTR、527 bp的3'UTR和2 388bp的ORF。利用实时定量PCR技术,对Pm GRP94组织特异性及其在不同p H、盐度和3种重金属应激下转录水平变化情况及特点进行了研究。结果显示,Pm GRP94基因存在组织特异性,并在肝胰腺中的表达量最高;不同的应激条件下其表达具有明显差异,其中在p H、铜(Cu)和锌(Zn)的应激下Pm GRP94的表达显著升高。因此预测该基因可以作为斑节对虾受p H、Cu和Zn胁迫的指示基因。
- 史进选傅明骏赵超周发林杨其彬邱丽华
- 关键词：斑节对虾GRP94基因克隆PH盐度
- 斑节对虾泛素结合酶PmUbc基因的克隆及表达分析被引量：3
- 2015年
- 以从斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组数据中筛选的泛素结合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme,Pm Ubc)基因片段为基础,利用SMART-RACE技术获得Pm Ubc的c DNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。Pm Ubc基因c DNA全长598 bp,包括编码154个氨基酸的465 bp的开放阅读框(ORF)、17 bp的5'非编码区(UTR)和116 bp的3'UTR。Blast分析显示,Pm Ubc与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等物种的Ubc具有较高的同源性。利用实时荧光定量PCR技术研究了Pm Ubc mRNA在不同组织和卵巢发育各时期的相对表达量和变化模式。结果表明,Pm Ubc mRNA在斑节对虾的脑、胸神经、心脏、肝胰腺、卵巢、肌肉、血淋巴中均有表达;Pm Ubc基因在卵巢发育Ⅲ期表达量最高,其次是Ⅰ和Ⅳ期。结果显示,Pm Ubc基因在斑节对虾卵巢发育过程中可能具有重要的作用,该实验结果为斑节对虾卵巢发育调控的分子机制研究提供一定的理论依据。
- 傅明骏赵超周发林邱丽华江世贵
- 关键词：斑节对虾泛素结合酶实时荧光定量PCR卵巢发育
- 斑节对虾细胞周期蛋白B慢病毒载体的构建及对Hela细胞增殖影响被引量：1
- 2014年
- 细胞周期蛋白B(Cyclin B)是影响卵母细胞发育成熟的重要基因。文章构建了PmCyB慢病毒表达载体,并和慢病毒包装复合物在293T细胞中包装成慢病毒颗粒。利用包装好的慢病毒颗粒,感染干扰了Cyclin B1基因的Hela细胞,研究了PmCyB对Hela细胞增殖的影响。结果表明,通过siRNA干扰细胞自身的Cyclin B1后,转染对照组病毒液的Hela细胞增殖减缓;同时,干扰后转入含有PmCyB重组慢病毒表达载体,Hela细胞增殖速度明显要高于转染对照组病毒液的Hela细胞的增殖速度。这一结果表明,PmCyB基因的过表达能补偿Cyclin B1缺失导致的细胞增殖减缓的现象,说明PmCyB基因具有细胞周期调控功能,是细胞增殖与分化的重要调控基因,且功能可能与人类的Cyclin B1相似。人类的Cyclin B1是卵母细胞发育成熟的重要基因。由此可以推断,PmCyB基因可能对斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育成熟起着重要作用。
- 周发林黄建华邱丽华杨其彬江世贵
- 关键词：斑节对虾慢病毒载体细胞增殖
- 斑节对虾过氧化氢酶基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：6
- 2015年
- 过氧化氢酶(catalase,CAT)是一种重要的抗氧化酶,防止过氧化氢对机体的氧化应激。该研究以斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组中筛选获得的CAT基因片段为基础,利用RACE技术获得斑节对虾CAT基因(Pm CAT)cDNA全长。该基因cDNA全长为1 909 bp,开放阅读框为1563bp,编码520个氨基酸。PmCAT推导的氨基酸序列与其他动物氨基酸序列具有高度的一致性。实时定量PCR结果显示,PmCAT基因在斑节对虾的不同组织中均有表达,其中在鳃的表达量最高,肝胰腺和胸神经次之。在硫酸铜(CuSO_4)胁迫下,PmCAT基因在肝胰腺中的表达量显著下调(P<0.05),在第24和第48小时恢复正常表达量;在pH 7.0胁迫下,PmCAT表达量在第12小时升高达最大值(P<0.05),然后恢复到正常水平;在pH 9.0胁迫下,PmCAT基因表达显著低于正常组(P<0.05)。研究表明,PmCAT基因参与斑节对虾氧化应激和对环境毒理的适应性反应。
- 傅明骏赵超杨其彬周发林江世贵邱丽华
- 关键词：斑节对虾过氧化氢酶PH胁迫
- 斑节对虾增殖细胞核抗原基因克隆及表达分析被引量：1
- 2016年
- 为研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育中的功能,利用RACE技术克隆得到了斑节对虾PCNA基因(PmPCNA)的cDNA全长序列。该序列全长978 bp,包括135 bp的5′非编码区(5′UTR)、60 bp的3′UTR和编码260个氨基酸的783 bp的开放阅读框(ORF)。同源性分析结果表明,PmPCNA与其他物种具有很高的蛋白同源性。组织表达模式分析表明,PmPCNA在所监测的各组织中为组成性表达,其中在卵巢和脑中表达量较高;卵巢发育不同阶段基因的表达分析则表明PmPCNA在Ⅲ期表达量最高,是其他各期表达量的2倍;注射五羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)后,PmPCNA在卵巢中表达量明显上升,其中在48 h表达量升高幅度最大,是对照组的5倍左右。利用原核表达技术获得了PCNA的体外重组蛋白,Western Blot分析证实该重组蛋白为PCNA蛋白。以上研究结果表明,PmPCNA蛋白是斑节对虾卵巢发育过程中的重要调节因子,本研究为进一步认识斑节对虾卵巢发育机制提供了基础资料。
- 王成扬赵超傅明骏邱丽华
- 关键词：斑节对虾卵巢发育
- 转录因子Relish在斑节对虾不同发育阶段的表达分析
- 2012年
- 对克隆获得的转录因子NF-κB/Rel家族成员Relish基因在斑节对虾发育阶段的表达特征进行分析。所获的PmRelish是Relish基因的亚型之一,与凡纳滨对虾LvRelish高度相似,结构域组成相同,其中RHD、IPT和DD结构域均具有100%的同源性,ANK结构域的相似性也高达97.7%。NF-κB/Rel家族进化树分析显示,PmRelish与对虾、昆虫等节肢动物的Relish聚为一支,并与P105(NF-κB1)和P100(NF-κB2)最为相近。PmRelish的表达在4个幼体发育时期都存在显著性差异,其中糠虾阶段表达量最高。PmRelish在不同发育阶段的精巢和卵巢中的表达特征相似,即未成熟期的表达相对较低,其中PmRelish在10～12 cm体长雄虾精巢中表达量最高,卵巢中的表达则在成熟期(V期)最高,为卵原细胞期的14.3倍。
- 刘文静杨丽诗杨其彬李晓兰苏天凤江世贵
- 关键词：斑节对虾发育阶段荧光定量PCR
