国家自然科学基金(31101923)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：大连海洋大学更多>>
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- 虾夷马粪海胆NLR家族基因片段的克隆及表达特征分析被引量：1
- 2014年
- 采用同源克隆和半定量RT-PCR方法,对虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius NLR家族基因片段进行了克隆和组织表达特征分析。将紫球海胆S.purpuratus的9组NLR家族聚类的编码区序列进行比对后,根据保守区域设计引物扩增虾夷马粪海胆中相应的基因,通过测序获得了9组不同NLR聚类基因片段,每组各10个测序结果,通过基因序列及氨基酸序列比对分析,发现存在长度及序列结果上的差异,这说明每组NLR家族聚类都存在多个家族成员。同时选取虾夷马粪海胆的不同组织提取RNA,反转录后使用同样的引物进行半定量RT-PCR分析,结果表明,NLR基因在虾夷马粪海胆的管足、肠、围口膜、体腔细胞、性腺中存在高效表达,且在围口膜及性腺中表达量最高,表明NLR基因在虾夷马粪海胆中普遍表达,并存在表达差异。研究表明,NLR基因在海胆免疫过程中起着重要作用。
- 陈亚东刘晓飞常亚青仇雪梅王秀利刘洋
- 关键词：虾夷马粪海胆
- 虾夷马粪海胆LRCH2-Like基因的克隆与表达特征分析
- 2018年
- 本实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了一条虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus inter-medius)LRCH2-like基因的全长cDNA序列。SiLRCH2-like基因全长为2446 bp,其中编码区为1644 bp,3’-UTR为609 bp,5’-UTR为193 bp,编码548个氨基酸,预测的蛋白分子量为59.9 KDa,理论等电点为4.07,为酸性蛋白,有1个Na-Ca-ex-superfamily结构域和7个LRR结构域。我们采用实时定量PCR技术分析了SiLRCH2-like基因在各组织中的表达情况。他在所有检测的组织中均有表达,在雌性性腺中表达量最高,其次是肠道、管足,体腔细胞和围口膜中表达量较少,在雄性性腺中几乎检测不到表达。我们也检测了该基因在强壮弧菌(Vibrio fortis)、脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、葡聚糖(WGP)、聚肌胞苷酸(polyI:C)五种病原刺激后的体腔细胞中的表达情况。SiLRCH2-like基因在PGN处理后在12 h出现了表达高峰,在WGP处理后出现了表达下调,而其他病原处理后表达上调不明显。研究结果表明,SiLRCH2-like基因参与了虾夷马粪海胆的NLR信号通路,它在海胆的天然免疫系统中发挥了重要的作用。
- 邹惠冬白莉刘圣美陈亚东周淑红仇雪梅刘洋
- 关键词：虾夷马粪海胆RACE实时定量PCR
- 光棘球海胆CYP17基因的SNPs标记筛选及遗传分析被引量：1
- 2013年
- 采用聚合酶链式反应、单链构象多态性(PCR-SSCP)技术和基因测序方法筛选光棘球海胆Strongylocentrotus nudus细胞色素17α羟化酶/17,20裂解酶(17α-hydroxylase/17,20-lyase,CYP17)基因编码区单核苷酸多态性(SNPs),并进行了基于SNPs的遗传分析。结果表明:在CYP17基因的270、417、666 nt处均发生了碱基的点突变,即G270A、A417G和C666T,前两个突变位点位于引物对BF/BR的扩增产物中,后一个突变位点位于引物对CF/CR的扩增产物中;引物对BF/BR的扩增产物可形成3种基因型,即AA、BB和AB基因型,A和B等位基因频率分别为0.54和0.46,AA、AB和BB基因型频率分别为0.30、0.48和0.22,该座位的杂合度(He)、纯合度(Ho)、多态性信息含量(PIC)和有效等位基因数(Na)分别为0.496 8、0.503 2、0.373 4和1.987 3;引物对CF/CR的扩增产物形成了两种基因型,即CC和CD基因型,C和D等位基因频率分别为0.68和0.32,CC和CD基因型频率分别为0.84和0.16,该座位的He、Ho、PIC和Na分别为0.268 8、0.731 2、0.232 7和1.367 6。遗传变异分析结果表明:两个座位均属于低度多态性,而且群体遗传杂合度较低,这反映了该群体的遗传一致性较高。本研究筛选的3个SNPs为今后CYP17基因在光棘球海胆性腺生长发育研究上提供了前期科研基础。
- 朱琳琳王秀利王洪迪郭晓黎常亚青刘洋仇雪梅
- 关键词：光棘球海胆CYP17基因单核苷酸多态性
- 虾夷马粪海胆TNFAIP3基因的克隆与表达分析
- 2018年
- 采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得一条虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius) SiTNFAIP3基因cDNA全长序列。实时定量PCR检测了SiTNFAIP3基因在组织中的分布及在经脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、聚肌胞苷酸(poly I: C)、强壮弧菌(Vibrio fortis)和葡聚糖(WGP)刺激后的表达情况。结果表明:SiTNFAIP3的cDNA全长为3990 bp,5’-UTR为209 bp,开放阅读框为3567 bp,3’-UTR为214 bp,编码1188个氨基酸,具有1个OTU结构域和8个ZnF-A20结构域;qRT-PCR结果显示SiTNFAIP3在检测的各组织中均有表达,卵巢中的表达量显著高于其它组织(p <0.05);经PGN、V. fortis刺激后,体腔细胞中SiTNFAIP3表达量显著上升,在刺激后12 h达到最高值(p <0.05);经LPS、poly I: C刺激后,体腔细胞中SiTNFAIP3表达变化较小;而经WGP刺激后,体腔细胞中SiTNFAIP3表达出现下调。研究表明,SiTNFAIP3基因参与了虾夷马粪海胆的NLR、TLR和RLR信号通路,但主要参与了NLR信号通路。SiTNFAIP3基因在海胆的先天免疫中发挥重要作用。
- 刘圣美陈亚东常亚青王秀利仇雪梅刘洋
- 关键词：虾夷马粪海胆先天免疫负调控
- 虾夷马粪海胆X染色体连锁凋亡抑制蛋白XIAP基因克隆及不同病原微生物刺激后的表达响应
- 2022年
- 为研究X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius(体质量为40~80 g)天然免疫系统中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得虾夷马粪海胆XIAP基因的cDNA序列,并通过实时定量PCR分析了其在各组织中的分布,以及经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、肽聚糖(peptidoglycan,PGN)、聚肌胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,Poly I:C)、强壮弧菌Vibrio fortis和葡聚糖(whole glucan particles,WGP)刺激后,XIAP基因在体腔细胞中的表达情况。结果表明:虾夷马粪海胆XIAP基因的cDNA长为4894 bp,其中,5′UTR为459 bp,开放阅读框为2331 bp,3′UTR为2104 bp,共编码776个氨基酸,具有3个BIR结构域和1个RING指环结构域,预测该蛋白相对分子质量为86960,等电点为5.96,为酸性蛋白;虾夷马粪海胆XIAP基因在检测的各组织中均有表达,其中,在卵巢中的表达量显著高于管足、体腔细胞、围口膜、肠和精巢(P<0.05);经PGN、LPS、Poly I:C、WGP和V.fortis刺激后,体腔细胞中的XIAP基因表达量显著上升(P<0.05),并在PGN、LPS和Poly I:C刺激后12 h,WGP刺激后24 h,V.fortis刺激后6 h时,XIAP基因表达量均达到最高值。研究表明,克隆获得的XIAP基因参与了虾夷马粪海胆的免疫应答,并在海胆的天然免疫中发挥重要作用。
- 刘圣美尚凤芹陈亚东常亚青王秀利仇雪梅刘洋
- 关键词：虾夷马粪海胆肽聚糖聚肌胞苷酸
