“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09501-031)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王莉莉薛燕赵永强李萍王晨更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京师范大学中国人民解放军总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 细胞组学在新药研发中的应用被引量：1
- 2009年
- 细胞组学是近年来发展起来的一种致力于确定单细胞分子表型,进而研究细胞结构及分子功能的科学。其本质是使用高灵敏多参数荧光分析方法整合多种单细胞的不同事件,阐释组织和有机体的复杂事件和行为。借助于快速发展的细胞生物成像和生物信息技术及其高内涵和高通量的分析能力,细胞组学已应用到新药筛选、候选药物优化等新药研发的各个阶段,为高效发现创新药物提供了颇具优势的评价体系。
- 王晨赵长琦王莉莉
- 关键词：新药发现流式细胞术
- 互补多酶解法在蛋白质C末端质谱检测中的应用
- 2011年
- 建立了互补型多酶解法与串联质谱联用鉴定蛋白C末端技术。在大量蛋白的实际检测中,根据蛋白序列分别采用溴化氰、胰蛋白酶、谷氨酸内切酶和糜蛋白酶进行酶解或混合酶解。利用此技术对8个蛋白不同长度的C末端肽段（分子量分布在200~3000 Da之间,目的肽段分别为m/z272.20,788.45,796.48,944.58,1146.69,1151.67,1529.61和2147.04）进行ESI-MS/MS检测,分别获得了8个不同长度的蛋白C末端氨基酸序列：PR,SLSLSPGK,GNVTGMFA,LAC＊GVIGIAQ,DHWPEANQVG,FIAWLVKGRG,GTLGIVC＊PIC＊SQKP和HEALHNHYTQKSLSLSPGK。
- 杨洁姚树森赵永强薛燕李萍
- mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响
- 2011年
- 目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体。将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度。结果质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确。载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象。c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生。结论成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc。载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能。
- 杨胜乾龙隆李微王莉莉
- 关键词：真核表达载体TEL信号转导和转录激活因子核转位激酶抑制剂
- 重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析被引量：1
- 2011年
- 目的：基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C末端方法结合优化后的质谱检测技术,对C末端长度分别为2~37个氨基酸,相对分子质量在200~5000的8个重组蛋白药物进行检测。方法：（1）针对重组蛋白药物的不同状态（SDS-PAGE、干粉或溶液）分别进行C末端胶内或溶液裂解;（2）质谱检测,正离子方式,雾化气为氮气,碰撞气体为氩气。源温80℃,锥孔电压50 V,MCP检测器电压为2.15 kV。结果：8个重组蛋白药物的C末端全部成功检测出,且基本为基峰。结论：建立的重组蛋白药物C末端测序联用方法应用于实际药物的检测具有很高的实用价值和学术意义。
- 李萍赵永强薛燕刘锋刘炳玉何昆王红霞
