安徽省自然科学基金(070413077)
- 作品数：10 被引量：51H指数：4
- 相关作者：张林杰张旭东吴萍陈思程文晋更多>>
- 相关机构：安徽医科大学淮北职业技术学院安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抑制MEK/ERK消除胃腺癌细胞对内质网应激性凋亡的耐受被引量：4
- 2008年
- 目的了解内质网应激诱导胃腺癌细胞凋亡情况及其作用途径,并探讨MEK/ERK信号途径在其中发挥的作用。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞周期DNA含量分析凋亡率,DAPI染色后荧光显微镜观察药物处理后死亡细胞形态特征及各组死亡差别,免疫印迹法(Western blot)检测衣霉素以及U0126诱导前后p-ERK、caspase-3、PARP的表达变化。结果不同浓度衣霉素(TM)诱导胃腺癌细胞48h凋亡率最高仅为15.65%,TM诱导ERK活化形式p-ERK表达增加,而在U0126处理后下调。U0126与TM共同作用于胃腺癌细胞时,凋亡率显著升高至38.3%±2.78%。荧光显微镜可观察到细胞内典型的凋亡小体,凋亡细胞比TM单独作用明显增多。U0126作用后TM诱发胃腺癌细胞caspase-3、PARP剪切、活化。结论TM可诱导胃腺癌细胞发生内质网应激反应性凋亡并且激活MEK/ERK信号通路,但对其相对不敏感。通过阻断MEK/ERK信号途径后能杀死大量胃腺癌细胞,caspase-3、PARP的活化表明胃腺癌细胞的内质网应激性凋亡依赖于caspase途径。
- 陈思吴萍江蓓蕾程文晋罗畅民张旭东张林杰
- 关键词：胃肿瘤内质网信号传导
- TRAIL联合紫杉醇诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡作用研究被引量：4
- 2012年
- 目的:观察紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其协同作用机制。方法:将TRAIL、紫杉醇及TRAIL联合紫杉醇诱导SGC-7901细胞48小时,用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和线粒体跨膜电位的改变;用MTT法检测SGC-7901细胞增殖反应;用免疫印迹(Westernblot)法检测TRAIL死亡受体DR4(TRAIL-R1)、DR5(TRAIL-R2)的表达变化。结果:TRAIL和/或紫杉醇对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,两者联合用药组对细胞增殖的抑制率较单独用药明显增加(P<0.01);联合用药组细胞凋亡率较单独用药组明显增加(P<0.01);0.3μmol/L紫杉醇作用48小时后,DR4表达明显升高(P<0.05),而DR5表达没有明显改变(P>0.05)。结论:紫杉醇可协同TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡,DR4表达增加可能是其协同作用的机制。
- 涂龙霞吴亚欧张林杰
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体紫杉醇SGC-7901细胞凋亡
- Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的研究Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的表达,探索紫杉醇作用的分子机制。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡过程中Bcl-2家族成员的表达水平变化。结果紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,SGC-7901较BGC-823胃腺癌细胞株对紫杉醇更为敏感。紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中,Bcl-2家族成员中促凋亡分子Bim表达水平增高,而抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xL表达降低。结论Bcl-2家族成员在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的调节作用。
- 沈茜苏浩张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡紫杉醇BCL-2
- 自噬及自噬性细胞死亡抑制紫杉醇诱导的胃癌细胞凋亡被引量：13
- 2007年
- 目的明确自噬和自噬性细胞死亡在胃癌SGC-7901及BGC-823细胞紫杉醇处理过程中的存在，探讨其对紫杉醇诱导的凋亡敏感性的作用。方法流式细胞仪和MTF法分别检测紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率，死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡。吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在，自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和紫杉醇共同作用细胞后流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果紫杉醇处理SGC-7901及BGC-823细胞早期（24h内）可出现明显的细胞自噬性变化，自噬高峰期出现紫杉醇诱导3～6h，自噬性细胞死亡存在并可能是紫杉醇诱导的非凋亡性细胞死亡的主要形式，抑制紫杉醇诱导的细胞自噬可以促进紫杉醇诱导细胞凋亡的发生。结论紫杉醇可以诱导胃癌SGC-7901及BGC-823细胞自噬及自噬性细胞死亡，并且紫杉醇诱导的胃癌细胞自噬会拮抗胃癌细胞凋亡的发生，从而为胃癌化疗耐受提供新的解释，可能为胃癌治疗提供新的途径。
- 占贞贞陈思叶艳吴萍张旭东张林杰
- 关键词：自噬自噬性细胞死亡
- 高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响被引量：5
- 2010年
- 目的探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用。方法采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Westernblot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Westernblot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化。结果衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显。由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调。通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降。结论Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用。
- 吴亚欧张林杰张旭东余宏伟
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡衣霉素转染
- E2F-1在胃腺癌细胞内质网应激反应中对Mcl-1的调控作用被引量：8
- 2011年
- 目的探讨Mcl-1在胃腺癌细胞对内质网应激诱导细胞凋亡耐受中的作用,以及内质网应激状态下E2F-1调控Mcl-1的机制。方法采用PI单染法测定细胞凋亡率;Western blot检测GRP78、Mcl-1、Bcl-2、E2F-1蛋白变化;实时荧光定量PCR检测Mcl-1 mRNA水平变化;转染pcDNA-E2F-1-Flag质粒使细胞高表达E2F-1。结果胃腺癌细胞对衣霉素(TM)诱导的内质网应激性凋亡相对不敏感,这与Mcl-1在蛋白水平和mRNA水平的上调有关。Mcl-1的转录抑制因子E2F-1在TM诱导细胞后表达下调。在内质网应激状态下的胃腺癌细胞中高表达E2F-1可以减弱Mcl-1的上调。结论内质网应激反应引起Mcl-1上调可能在胃腺癌细胞对内质网应激诱导的凋亡耐受中起重要作用;转录因子E2F-1下调可能参与调控Mcl-1的表达。
- 王丽侯丽丽吴亚欧桂丽张旭东张林杰
- 关键词：腺癌内质网衣霉素
- siRNA特异性“沉默”Bim基因对胃腺癌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2007年
- 目的研究BH3-only蛋白Bim在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的作用。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;在紫杉醇相对敏感SGC-7901胃腺癌细胞株中采用小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"Bim基因;Western blot分别检测紫杉醇诱导siRNA"沉默"Bim基因前后Bim蛋白的表达水平变化。结果紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,SGC-7901较BGC-823胃腺癌细胞株对紫杉醇更为敏感。紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823胃腺癌细胞很大程度依赖线粒体途径凋亡。特异性"沉默"Bim基因的转录,紫杉醇诱导凋亡敏感细胞株SGC-7901的凋亡率明显降低。结论Bim在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥关键调节作用。
- 江蓓蕾叶艳程文晋陈思吴萍张旭东张林杰
- 关键词：细胞凋亡紫杉醇SIRNA小分子干扰
- 线粒体凋亡途径参与TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡被引量：5
- 2007年
- 目的研究TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡的途径。方法PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡;广谱caspase抑制剂(z-VAD-fmk)、caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)和caspase-9抑制剂(z-LEHD-fmk)分别与TRAIL共同作用后PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测caspase-3的活化及PARP的裂解;JC-1染色、流式细胞仪分析线粒体膜电位的变化。结果TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg/L)作用24h细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%;3种caspase抑制剂都能很大程度上阻止TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡;caspase-3、PARP在TRAIL作用早期即活化、裂解,且BGC-823比SGC-7901发生得更快;线粒体膜电位随TRAIL处理时间延长而不断下降。结论TRAIL能诱导胃腺癌细胞凋亡,且这种凋亡依赖于caspases;除死亡受体途径外,线粒体途径也参与了凋亡信号通路。
- 吴萍陈思程文晋江蓓蕾张旭东张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡线粒体
- 衣霉素增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性被引量：4
- 2008年
- 目的探讨衣霉素对TRAIL(TNF-related apoptosis-in-ducing ligand)诱导的胃腺癌细胞的凋亡的作用。方法PI染色流式细胞仪检测衣霉素与TRAIL作用于细胞前后细胞凋亡率的变化;双抗体流式细胞仪检测药物作用前后细胞表面TRAIL受体表达情况;W estern b lot检测药物作用前后caspase蛋白水平的变化;JC-1染色流式细胞仪检测药物作用前后线粒体膜电位的变化。结果衣霉素可明显增加TRAIL诱导的胃腺癌细胞凋亡率;衣霉素作用于胃腺癌细胞后,细胞表面TRAIL-R2表达明显增高;衣霉素促进TRAIL诱导的胃腺癌细胞caspase-3、PARP活化和线粒体膜电位减少。结论衣霉素可通过上调细胞表面TRAIL受体表达来增强胃腺癌细胞对TRAIL诱导的凋亡的敏感性,这种致敏性与激活caspase级联反应和线粒体膜电位减少有关。
- 程文晋吴萍陈思江蓓蕾叶艳张旭东张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡衣霉素
- 胃癌细胞TRAIL受体的表达与其对TRAIL敏感性的关系被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨胃癌细胞表面TRAIL受体表达水平及其与TRAIL敏感性的关系。方法:PI染色、流式细胞仪检测TRAIL诱导BGC-823及SGC-7901细胞的凋亡率,流式细胞仪检测细胞膜表面四种TRAIL受体-R1、R2、R3、R4的表达情况。结果:TRAIL诱导胃癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg·L^(-1))作用24 h的细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%。死亡受体TRAIL-R1/DR4、TRAIL-R2/DR5在BGC-823细胞膜表面表达的阳性率高达97.87%和99.42%,而在SGC-7901分别为7.03%和95.31%,诱骗受体TRAIL-R3/DcR1、TRAIL-R4/DcR2在两株细胞膜表面极少表达。结论:胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性差异可能与细胞膜表面死亡受体有关,尤其与DR4的表达有关。
- 吴萍张旭东张林杰
- 关键词：胃肿瘤细胞凋亡TRAILTRAIL受体
