北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目(2009-3-51)
- 作品数：11 被引量：42H指数：4
- 相关作者：张宗德贾红彦邢爱英杜凤娇孙琦更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌总RNA提取方法的比较研究
- 2012年
- 目的鉴于结核分枝杆菌RNA提取难度很大，为了提取到高质量的RNA，探讨两种不同方法提取结核分枝杆菌总RNA，并在实验中对其进行优化。方法收集结核分枝杆菌培养物，分别用甲醇和玻璃粉裂解其细胞壁，然后加入Trizol提取结核分枝杆菌总RNA，用琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，用Nanodrop2000检测其得率和纯度。结果玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率分别为6．124±l｜144和13．437±1．76760〈0．01），纯度A260／A280的值分别为1．924±0．039和1．899±0．072（P〉O．01）。结论玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA均未发生明显降解。用甲醇裂解法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率明显高于玻璃粉法，差异具有显著性；方法完整性和纯度均能满足实验需要，无明显差异。
- 贾红彦李自慧杜博平邢爱英孙琦张宗德焦媚
- 关键词：分枝杆菌结核核糖核酸
- 结核感染T细胞酶联免疫斑点试验与结核抗体检测在骨关节结核辅助诊断中的价值
- 2015年
- 目的探讨与评价结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT．TB）与结核抗体检测在骨关节结核中的辅助诊断价值。方法将2011年7月至2013年lO月在北京胸科医院骨科住院并手术诊治的骨关节疾病患者156例，经细菌学和组织病理学确诊后分为骨关节结核患者92例和非结核骨关节疾病患者64例，对所有患者应用T-SPOT．TB试剂盒检测结核分枝杆菌特异性抗原早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）和培养滤液蛋白-10（CFP-10）刺激后外周血中分泌Y干扰素的特异性T细胞的数量，同时对两组患者行血清结核分枝杆菌特异性抗体检测。采用SPSS17．0进行统计学分析，，检验比较两种检测方法诊断骨关节结核的敏感度和特异度，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果T-SPOT．TB检测在诊断骨关节结核中的敏感度为93．5％（86／92），特异度为78．1％（50／64）；结核抗体检测的敏感度、特异度分别为64．1％（59／92）、81．3％（52／64）。T-SPOT．TB检测的敏感度高于结核抗体检测p=23．72，P〈0．01）。结论T-SPOT．TB检测方法在辅助骨关节结核快速诊断方面具有重要的应用价值。
- 范俊秦世炳贾红彦潘丽萍兰汀隆
- 关键词：结核Γ干扰素释放试验抗体
- 结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药相关基因的筛选及鉴定被引量：6
- 2012年
- 目的筛选二线抗结核药物对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)的耐药相关基因。方法构建H37Rv转座子文库,筛选PAS耐药克隆,随机引物PCR扩增转座子插入突变基因。在PAS耐药菌株中鉴定耐药相关基因的突变情况。结果构建了较完整的H37Rv转座子文库,并筛选出201个PAS耐药克隆,经测序找到4个可能的PAS耐药相关基因,分别是Rv1534、pknF、ndh、papA1。papA1基因检测到一个无义突变,为papA1基因339位C→T点突变。结论酰基转移酶基因papA1可能为PAS耐药相关基因。
- 郑晓静杜博平贾红彦侯继增杨超高汉青杜凤娇邢爱英李自慧曹廷明张宗德李琦
- 关键词：结核分枝杆菌耐药对氨基水杨酸基因
- 微小RNA在感染性疾病及结核病中的研究进展被引量：3
- 2014年
- 微小RNA（miRNA）属于非编码RNA大家族，是内源性含22个寡核苷酸的小分子RNA序列，从病毒、线虫、植物到动物体内都存在miRNA，并在细胞生长、分化、凋亡、代谢及病毒感染、肿瘤发生等生理、病理过程中发挥至关重要的作用。目前发现，循环miRNA异常表达出现在肿瘤、肝炎、糖尿病和心肌梗死等患者中。循环miRNA或可作为肿瘤无创诊断的新靶标，然而，miRNA在细菌感染性疾病，尤其是结核病发生、发展中的作用尚不明确。
- 刘菲张宗德
- 关键词：细菌感染性疾病结核病微小RNA非编码RNA肿瘤发生RNA序列
- 酶联免疫斑点试验在骨关节结核中的辅助诊断价值被引量：12
- 2012年
- 目的探讨评价酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在骨关节结核病中的辅助诊断价值。方法对骨关节结核病组30例和对照组21例患者,应用ELISPOT试验检测结核菌特异性6kD早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和10kD培养滤过蛋白(CFP-10)刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞。同时对关节穿刺液或手术标本进行涂片、培养、聚合酶链反应(PCR)检测结核菌特异DNA以及病理检查诊断。结果骨关节结核病患者中ELISPOT检测敏感性为96.7%(29/30),特异性为76.2%(16/21),阳性预测值、阴性预测值和阳性似然比分别为85.3%、94.2%和2.86。抗酸杆菌涂片、结核菌培养、PCR和病理诊断的敏感性分别为23.3%(7/30),30.0%(9/30),46.7%(14/30)和93.3%(28/30)。结论 ELISPOT检测方法在骨关节结核病中具有一定的辅助诊断价值,其敏感性明显高于临床常规检测方法。
- 贾红彦兰汀隆刘菲杜凤娇魏荣荣杜博平邢爱英孙琦秦世炳张宗德
- 关键词：骨关节结核酶联免疫斑点试验干扰素
- γ-干扰素释放试验中两种细胞计数方法的对比分析被引量：1
- 2014年
- 目的比较Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪和显微镜人工镜检两种计数方法对外周血单个核细胞(PBMC)悬液的计数结果,探讨Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪用于γ-干扰素释放试验(T-SPOT.TB)中细胞定量的可行性。方法随机抽取T-SPOT.TB检测中的60份血液标本,对其外周血单个核细胞悬液,分别用人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数PBMC,同时进行T-SPOT.TB检测,对结果进行比较分析。结果人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪两种计数方法相关性好(r=0.967);细胞悬液用人工显微镜计数所得PBMC浓度为(6.03±2.18)×109/L,用Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数所得PBMC浓度为(6.10±2.34)×109/L,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);按两种计数方法所得T-SPOT.TB检测结果一致性好。结论 Muse cell analyzer自动细胞分析仪计数可取代人工显微镜计数法用于T-SPOT.TB检测中对细胞悬液中PBMC的计数。
- 贾红彦潘丽萍杜博平孙琦邢爱英杜凤娇张宗德
- 结核分枝杆菌总RNA提取方法的比较研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨两种不同方法提取结核分枝杆菌总RNA,并在实验中对其进行优化。方法收集结核分枝杆菌培养物,分别用甲醇和玻璃粉裂解其细胞壁,然后加入Trizol提取结核分枝杆菌总RNA,用琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,用Nano-drop2000检测其得率和纯度。结果玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率分别为6.124±1.144和13.437±1.767(P<0.01),纯度A260/A280的值分别为1.924±0.039和1.899±0.072(P>0.01)。结论玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA均未发生明显降解,其完整性均能满足后续实验的需要。用甲醇裂解法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率明显高于玻璃粉法。
- 贾红彦李自慧杜博平邢爱英孙琦张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌核糖核酸
- 结核分枝杆菌体内外转录谱差异的研究进展
- 2013年
- 自20世纪80年代以来结核病发病率回升，2011年，全球结核病新发病例870万，我国结核病发病人数居世界第2位。结核病的病原菌是MTB。MTB标准株H37Rv全基因组测序工作的完成，使MTB分子生物学研究进入后基因组时代。转录组学是一门在整体水平上研究细胞中基因转录情况及转录调控规律的学科，也是研究细胞表型和功能的重要手段。
- 郑晓静张宗德李琦
- 关键词：转录调控结核分枝杆菌体内外后基因组时代细胞表型H37RV
- 结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性和克隆表达被引量：2
- 2011年
- 目的鉴定结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性,克隆表达该基因并获得其重组蛋白。方法设计Rv1512基因的特异性引物,并鉴定其特异性。构建pET30a(+):Rv1512重组质粒,阳性克隆转化入大肠杆菌BL21。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE鉴定该蛋白及其纯度。结果结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性被证实;经测序分析证实Rv1512原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE结果显示在40 kD处呈现单一蛋白条带。结论结核分枝杆菌Rv1512基因具有较好的特异性;成功构建表达载体pET30a(+):Rv1512并获得重组蛋白,为辅助诊断结核分枝杆菌的感染奠定基础。
- 曹廷明贾红彦杜凤娇刘洋刘忠泉马玙张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌特异性重组蛋白质
- 微小RNA在感染性疾病及结核病中的研究进展被引量：1
- 2014年
- 微小RNA（miRNA）属于非编码RNA大家族，是内源性含22个寡核苷酸的小分子RNA序列，从病毒、线虫、植物到动物体内都存在miRNA，并在细胞生长、分化、凋亡、代谢及病毒感染、肿瘤发生等生理、病理过程中发挥至关重要的作用。目前发现，循环miRNA异常表达出现在肿瘤、肝炎、
- 刘菲张宗德
- 关键词：感染性疾病微小RNA结核病非编码RNA肿瘤发生RNA序列
