中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0302012002)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：蔡红王姝朱远茂史鸿飞马磊更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2013年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。
- 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2单克隆抗体IGM
- 牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。
- 马磊朱远茂蔡红王姝史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 牛腺病毒3型六邻体蛋白的截短表达、单克隆抗体制备及初步应用
- 2014年
- 为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好的反应性。特异性试验表明这些MAbs与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。免疫组化试验表明其中一株1F8亲和力最强,可以用于检测BAV-3。本研究为进一步鉴定BAV-3抗原表位及研发相应的诊断试剂奠定了基础。
- 严昊朱远茂史鸿飞王雪枝蔡红王姝马磊薛飞
- 关键词：单克隆抗体特异性
