博士科研启动基金(2009-168)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 相关作者：倪志华周艳芬张瑞英武金霞王振山更多>>
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- 壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探被引量：3
- 2013年
- 目的研究壳寡糖对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响。方法利用金属配位氧化法制备壳寡糖,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的壳寡糖处理不同时间对A549细胞增殖的抑制作用,Wright's-Giemsa染色后观察壳寡糖处理后的A549的形态学变化,利用免疫组织化学法分析壳寡糖对A549细胞中Bcl-2、Bax、Survivin表达量的影响。结果 5.0 mg/ml壳寡糖处理A549细胞48 h后对细胞增殖的抑制率为56.70%。荧光显微镜下观察Wright's-Giemsa染色后细胞的细胞膜褶皱,细胞核固缩,并出现凋亡小体。免疫组织化学法分析表明,壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达。结论壳寡糖对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,推测其可能通过上调Bax和下调Bcl-2、Survivin的表达诱导细胞凋亡。
- 杨欢欢周艳芬武金霞郝江叶倪志华王振山
- 关键词：壳寡糖A549细胞BAX
- 弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其抗肿瘤的作用机制。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的弯齿琵甲含药血清,MTT法检测不同浓度含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;显微镜下观察W right's-G iem sa染色和吖啶橙-EB染色后细胞的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA断裂情况。结果宫颈癌HeLa细胞经不同剂量的弯齿琵甲含药血清分别作用24、48 h后,细胞增殖明显受到抑制,且呈时效、量效关系;倒置显微镜下观察可见细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见早期凋亡细胞呈黄绿色球状,晚期凋亡细胞呈红色球状;凋亡细胞经琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带。结论弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖具有明显的抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。
- 周艳芬田景贤倪志华靳祎张瑞英任国栋
- 关键词：药理学HELA细胞系细胞凋亡
- 壳寡糖对Hela细胞的增殖抑制与诱导凋亡被引量：1
- 2015年
- 为了明确壳寡糖(COS)对Hela细胞的增殖抑制作用及对凋亡的影响,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测增殖抑制作用,Wrights-Giemsa及吖啶橙-溴乙锭(AO-EB)染色观察凋亡细胞的形态,Annexin V-FITC/PI法检测凋亡率,免疫组化法分析Bax,Bcl-2和Survivin表达量变化.结果显示:不同浓度COS处理Hela细胞均能抑制增殖,5.0mg/mL并作用24h对其增殖抑制率为52.15%(P<0.01).Wrights-Giemsa染色显示细胞形态趋近圆形,贴壁能力减弱,出现凋亡小体.AO-EB染色时细胞出现早期和晚期凋亡现象.AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率为31.75%(P<0.05).免疫组化分析细胞内Bax表达量增加,Bcl-2和Survivin表达量降低.表明COS能够抑制Hela细胞增殖并诱导凋亡,其原因与Bax的上调和Bcl-2与Survivin的下调相关.
- 韩绍芳周艳芬倪志华武金霞王振山
- 关键词：壳寡糖HELA细胞增殖抑制作用细胞凋亡
- 瓜蒌含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响被引量：10
- 2011年
- 目的研究瓜蒌水煎剂含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用血清药理学方法制备瓜蒌含药血清,MTT法检测含药血清对HeLa细胞生长的抑制作用,Wright's-Giemsa染色和吖啶橙-EB染色在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA Ladder。结果 HeLa细胞经不同剂量的瓜蒌含药血清作用24,48 h后,细胞体外抑制作用明显,呈量效、时效关系;倒置显微镜观察可见HeLa细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见晚期的凋亡细胞被染成红色,细胞固缩成球状;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞发生了DNA断裂,呈梯状条带。结论瓜蒌含药血清对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。
- 周艳芬田景贤靳祎倪志华张瑞英朱宝成
- 关键词：瓜蒌血清药理学HELA细胞系凋亡
- 大鼠LC3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)在哺乳动物细胞中定位于自噬泡上,可作为一种特定的标记用来检测自噬。从SD大鼠脑组织提取总RNA,经RT-PCR扩增得到LC3全长编码基因,并克隆到pMD1 8-T载体。以测序验证正确的重组子为模板扩增LC3基因,并构建pUC18-LC3重组质粒,将其转化到E.coli BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果表明,菌体诱导后形成包涵体形式的表达产物,以电泳回收目的蛋白并免疫新西兰白兔,获得大鼠LC3蛋白多克隆抗体。western blot结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别LC3蛋白。
- 倪志华张瑞英张玉明周艳芬
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 壳寡糖对HeLa细胞和A549细胞自噬性死亡的影响被引量：4
- 2015年
- 为了探讨壳寡糖(COS)对He La细胞和A549细胞自噬性死亡的影响,利用不同浓度COS处理细胞后MTT法检测细胞的增殖抑制情况,采用MDC染色法观察自噬泡的形成,免疫荧光法检测LC3在细胞内的表达,Western-blot分析COS处理He La和A549细胞不同时间后细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ变化。结果表明,5.0 mg·m L-1COS对两种细胞的增殖抑制率最大,分别为52.15%和57.63%(P<0.01)。与阴性对照相比,经COS处理后的细胞MDC染色细胞内荧光强度增加,且阳性信号聚集于核周区域;免疫荧光检测发现LC3阳性颗粒数明显增加,表明细胞内自噬体的数量增多。Western-blot检测分析随着COS处理细胞时间延长,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值逐渐增大,显示细胞内自噬活性增强。由此推测COS能够通过诱导He La和A549细胞的自噬性死亡来抑制细胞增殖,为COS的抗肿瘤作用机制的研究提供理论依据。
- 周艳芬韩绍芳倪志华杨欢欢武金霞王振山
- 关键词：自噬性死亡HELA细胞A549细胞壳寡糖
